猪伪狂犬病毒抗体Gb(PRV Gb)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒目的：本试剂盒用于检测猪血清，血浆中伪狂犬病毒抗体Gb(PRV Gb)水平。
实验原理：
本试剂盒采用双抗原夹心酶联免疫法（ELISA）测定标本中猪伪狂犬病毒抗体Gb(PRV Gb)。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中PRV Gb相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在4*0nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中猪伪狂犬病毒抗体Gb(PRV Gb)的存在与否。
样本处理及要求：
*. 血清：室温血液自然凝固*0-20分钟，离心20分钟左右（2000-*000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合*0-20分钟后，离心20分钟左右（2000-*000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
*. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-*000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-*000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH*.2-*.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到*00万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-*000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
*. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH*.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH*.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-*000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
*. 不能检测含NaN*的样品，因NaN*抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤：
*. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照*孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照*0μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品*0μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，
*. 温育：用封板膜封板后置**℃温育*0分钟。
4. 配液：将*0（48T的20倍）倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml后备用
*. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置*0秒后弃去，如此重复*次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂*0μl，空白孔除外。
*. 温育：操作同*。
8. 洗涤：操作同*。
*. 显色：每孔先加入显色剂A *0μl，再加入显色剂B *0μl，轻轻震荡混匀，**℃避光显色**分钟
*0. 终止：每孔加终止液*0μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
**. 测定：以空白空调零，4*0nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后**分钟以内进行。
猪伪狂犬病毒抗体Gb(PRV Gb)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒结果判定：
试验有效性：阳性对照孔平均值≥*.00; 阴性对照平均值≤0.*0
临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.**
阴性判定：样品OD值< 临界值（CUT OFF）者为猪PRV Gb阴性
阳性判定：样品OD值≥ 临界值（CUT OFF）者为猪PRV Gb阳性
注意事项
*．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。
2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡**-*0分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
*．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
*．底物请避光保存。
6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为6*0nm
*．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。
保存条件及有效期
*．试剂盒保存：；2-8℃。
2．猪伪狂犬病毒抗体Gb(PRV Gb)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒有效期：6个月