鱼γ干扰素(IFN-γ)酶联免疫分析试剂盒实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鱼γ干扰素(IFN-γ)水平。用纯化的鱼γ干扰素(IFN-γ)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入γ干扰素(IFN-γ)，再与 HRP标记的γ干扰素(IFN-γ)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的γ干扰(IFN-γ)呈正相关。用酶标仪在 4*0nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鱼γ干扰素(IFN-γ)浓度。

试剂盒组成


标本要求

*．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN*的样品，因   NaN*抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

鱼γ干扰素(IFN-γ)酶联免疫分析试剂盒操作步骤

*.  标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。



2.  加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 *0µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 *0µl（样品zui终稀释度为 *倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

*.温育：用封板膜封板后置 **℃温育*0分钟。

4.配液：将 *0倍浓缩洗涤液用蒸馏水  *0倍稀释后备用

*.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 *0秒后弃去，如此重复 *次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂 *0µl，空白孔除外。

*.温育：操作同 *。

8.洗涤：操作同 *。

*.显色：每孔先加入显色剂 A*0µl，再加入显色剂 B*0µl，轻轻震荡混匀，**℃避光显色

**分钟.

*0.终止：每孔加终止液    *0µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

**.测定：以空白空调零，4*0nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后 **分钟以内进行。

鱼γ干扰素(IFN-γ)酶联免疫分析试剂盒操作程序总结：


计算

以标准物的浓度为横坐标， OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与  OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

注意事项

*．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 **-*0分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

*．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间zui好控制在 *分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，zui好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本  OD值大于标准品孔*孔的 OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×*）。

*．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

*．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

*．本试剂不同批号组分不得混用。

*0.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

鱼γ干扰素(IFN-γ)酶联免疫分析试剂盒保存条件及有效期

*．试剂盒保存：2-8℃。

2．有效期：6个月