1. 扩增曲线不光滑或波动

表现：曲线呈锯齿状或背景信号不均。

可能原因：

· 模板浓度过低导致信号弱，经系统矫正后波动。

· 仪器检测孔异常或电压/光源不稳定。

解决方案：

· 提高模板浓度重复实验。

· 检查仪器稳定性，必要时校准光学模块。

2. 扩增曲线断裂或下滑

表现：曲线在指数期突然下降。

可能原因：

模板浓度过高，基线期内提前起峰，仪器误判基线。

反应管中存在气泡，温度升高后破裂导致信号骤降。

解决方案：

调整基线终点范围（如从3-15循环改为3-10循环）重新分析。

加样时避免气泡，离心去除残留气泡。

3. 扩增曲线呈锯齿状且不连续

表现：曲线杂乱，重复性差。

可能原因：ROX荧光校正染料添加不当或浓度不均。

解决方案：

确认ROX添加步骤和浓度是否正确。

尝试去掉ROX分析数据，观察重复性是否改善。

4. 无扩增曲线或Ct值过大

表现：信号弱或无信号，Ct值超过3524。

可能原因：

热启动酶未充分激活或模板降解。

引物降解或特异性丧失。

解决方案：

延长预变性时间至10分钟激活酶。

检查引物完整性（电泳检测），避免反复冻融。

5. 其他硬件或操作问题

耗材影响：低质量耗材可能导致透光性差或封膜变形，引发信号异常。

仪器校准：定期校准温度模块和光学系统，确保信号采集稳定。

程序设置：检查循环数是否充足（建议40循环），确认信号采集步骤无遗漏。

总结建议

若问题持续，建议：

1. 备份数据后重装软件并恢复校准文件。

2. 联系工程师检查硬件（如温度传感器、加热块）。

3. 使用标准品验证仪器性能，排除试剂或操作因素。