牛神经肽Y（NP-Y）酶联免疫分析试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛神经肽 Y（NP-Y）水平。用纯化的牛神经肽
Y（NP-Y）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入神经肽 Y（NP-Y），
再与 HRP 标记的神经肽 Y（NP-Y）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底
洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui
终的黄色。颜色的深浅和样品中的神经肽 Y（NP-Y）呈正相关。用酶标仪在 4*0nm 波长下
测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中牛神经肽 Y（NP-Y）浓度。
试剂盒组成
*
*0 倍浓缩洗涤液
20ml×* 瓶
*
终止液
6ml×* 瓶
2
酶标试剂
6ml×* 瓶
8
标准品（4800ng/L）
0.*ml×* 瓶
*
酶标包被板
*2 孔×8 条
*
标准品稀释液
*.*ml×* 瓶
4
样品稀释液
6ml×* 瓶
*0
说明书
* 份
*
显色剂 A 液
6ml×* 瓶
**
封板膜
2 张
6
显色剂 B 液
6ml×*/瓶
*2
密封袋
* 个
标本要求
*．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含 NaN* 的样品，因 NaN* 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
牛神经肽Y（NP-Y）酶联免疫分析试剂盒操作步骤
*.
标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
2400ng/L
* 号标准品
**0µl 的原倍标准品加入 **0µl 标准品稀释液
*200 ng/L
4 号标准品
**0µl 的 * 号标准品加入 **0µl 标准品稀释液
600 ng/L
* 号标准品
**0µl 的 4 号标准品加入 **0µl 标准品稀释液
*00 ng/L
2 号标准品
**0µl 的 * 号标准品加入 **0µl 标准品稀释液
**0 ng/L
* 号标准品
**0µl 的 2 号标准品加入 **0µl 标准品稀释液
2.
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
2
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 *0µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，
然后再加待测样品 *0µl（样品zui终稀释度为 * 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
*.
温育：用封板膜封板后置 **℃温育 *0 分钟。
4.
配液：将 *0 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 *0 倍稀释后备用。
*.
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 *0 秒后弃去，如此
重复 * 次，拍干。
6.
加酶：每孔加入酶标试剂 *0µl，空白孔除外。
*.
温育：操作同 *。
8.
洗涤：操作同 *。
*.
显色：每孔先加入显色剂 A*0µl，再加入显色剂 B*0µl，轻轻震荡混匀，**℃避光显色
*0 分钟。
*0. 终止：每孔加终止液 *0µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
**. 测定：以空白空调零，4*0nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止
液后 ** 分钟以内进行。
操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
*
OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。
牛ELISA试剂盒注意事项
*．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 **-*0 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
*．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间zui好
控制在 * 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，zui好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值
大于标准品孔*孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计
算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×*）。
*． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
*．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
*．本试剂不同批号组分不得混用。
牛神经肽Y（NP-Y）酶联免疫分析试剂盒保存条件及有效期
*．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 个月