SCC-**细胞永生化人舌鳞癌 "

从最基础的地方教起，一步一步详细介绍细胞培养技术，非常好的开门教程
常用设备
准备室的设备：单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、
高压锅、储品柜（放置未消物品）、储品柜（放置消过的物品）、包装台。
配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。
培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、缸瓶、边台（书写实验记录）。
必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、CO2孵箱（孵育培养物）、水浴锅、三氧消杀菌机、4℃冰箱（放置serum和培养用液）。
无菌操作
无菌室的灭菌：
定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用*‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.*％过氧擦拭。
CO2孵箱（培养箱）灭菌：先用*‰新洁尔灭擦拭，然后用**％酒精擦拭或者0.*％过氧，再用紫外灯照射
实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-*0分钟
实验后灭菌：用**％酒精（*‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。
实验人员的无菌准备：
肥皂洗手。
穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋
用**％酒精棉球擦净双手。" "

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培养细胞真的不难，最关键几点：
*.所有的东西使用的，如果你用的血清、培养皿、培养基、胰酶什么的都是进口的，真的很难相信你会把细胞养坏。
2.动作要快，胰酶消化，换液什么，细胞暴露在空气中的时间越少越好。另外，要掌握好胰酶消化时间，所谓的细胞状态差，很多时候是传代的原因。
*.有时间的话，需要细胞计数，传相应数目的细胞到培养皿中，可以大致清楚细胞的生长曲线，不会临时要处理，手足无措。
4.要做什么心里要非常清楚，合理安排时间，细胞房的实验穿插进行，可以节省很多时间，也不会耽误别人的实验。
*.个人的实验器具自己收一套，不要和别人混用，最近换了什么新的东西稍微记一下，试剂一旦怀疑污染，马上丢。
6.细胞房不能进去太多人，避免相互干扰。
每天对待细胞比孝敬爹妈还用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丢了，培养细胞时有哪些经验教训可以分享呢?
*.严格无菌操作，多喷喷酒精，要是对灭菌的东西不放心，自己包自己送自己烘干。
2.不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套。
*.有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原测。
4.水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，勤换(灭菌水加进去)。
*.晚上离开的时候给细胞房照紫外，超净台是用完就开。
6.的是同一时间就你一个人在用细胞房在养细胞。
养了几年细胞，说一点自己培养细胞方面的看法：
*.培养细胞前，可以看看细胞特点说明书，包括细胞正常生长的状态图、传代、培养基的类型等。
2.不同细胞生长周期不同，有的生长很快，比如说MDA-MB-2**，传代的时候取离心悬液的十分之一就已经足够了，有的又是特别慢，等的人心焦，BT4*4就是，传代是一分二，复苏起始的时候两周多才能长满，所以就要在培养细胞的过程中多多摸索了。
*.对于娇弱的细胞，就得细心呵护了，胰酶消化不能过久，吹得时候要轻柔，离心时候也要注意转速和时间，每天都要去看一下细胞，肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况。
4.冻存细胞复苏后第二天更换一次培养基。
*.培养箱隔一段时间彻底用酒精棉擦洗一次。
6.养细胞*的教训：不能偷懒!
细胞虐我千百遍，我待细胞如初恋。
*.不管买的细胞、惠赠的细胞，刚拿到手赶紧做两件事：检测是否有支原体污染; 迅速扩增冻存。
2.发现有污染迅速处理掉，特别是当你养了很多种细胞时; 细菌污染，真菌污染很容易发现，支原体污染的话，细胞会长的慢，买个支原测的kit定期检测一下。
*.细胞房日常的值日清洁是必须的，此外还要定期熏蒸。
4.细胞的传代一定要规律，保持相同的confluency和传代时间间隔，不要随心所欲或者拖延。
*.注意个人卫生。" SCC-**细胞永生化人舌鳞癌 "

细胞接收操作说明：请仔细阅读本操作说明及相应的细胞说明书。
本公司细胞发货有四种形式：T2*培养瓶(一般是贴壁细胞使用，悬浮细胞也可以)、离心管(悬浮细胞使用多，当然，有些公司也会用这种离心管形式发贴壁细胞，但是，长期经验来说，贴壁细胞容易发生形态变化，估计是细胞培养空间狭小，血清不足导致(最主要是怕运输延误导致这些情况发生)，个人不建议用离心管形式发贴壁细胞)及干冰(冻存细胞用，主要是冬天天气冷，温度低于4℃的地方，都要考虑冻存细胞)。
T2*培养瓶：是用T2*细胞培养瓶直接发货的形式。收到细胞后，拆开包装T2*培养瓶的自封袋，不拆封口膜，表面喷**%酒精消后显微镜观察细胞状态（有条件可以拍下此时细胞照片）。将细胞放入**度培养箱平衡两小时以上，再处理细胞。首先将T2*中培养基取出装好备用，如细胞密度高于80%，可以直接消化传代，相反则加入*-6ml培养基放回培养箱继续培养即可。
离心管：是用**ml离心管发货的形式，只用于悬浮细胞发货。收到细胞后消处理及将细胞放入**度培养箱平衡两小时以上，再处理细胞。首先将T2*中培养基取出装好备用(如果实验室没有T2*培养瓶，可以暂时T** 培养瓶，加入*0-**ml培养基,，建议*0ml培养基，也可以使用T*** 培养瓶，加入*0-60ml培养基，培养瓶越大，需要的培养基越多。当然如果刚接收到细胞密度不够的话，不用大瓶子，先用小瓶子养起来再换大的，不然会长得很慢，严重的，会导致细胞死亡等危险)，平衡完成后，离心（*000rpm，*min）收集细胞，弃上清，用新的培养基重悬细胞并接种至培养瓶或皿中，放回培养箱继续培养。
干冰：是用本公司冻存液冻存细胞后，直接用干冰将冻存的细胞冷冻发货的形式。收到细胞后按照细胞复苏的步骤操作即可。
接收细胞相关问题：如不能在收到细胞后及时操作细胞，T2*及离心管发货的细胞将可以消后在**度过夜，血清发货的细胞在室温下静置*-2天（注意不要放冰箱），干冰发货的可以在确认干冰未完全升华时将细胞直接放回液氮或者-80度冰箱，若干冰完全升华，请即刻复苏细胞。
T2*瓶及离心管在培养箱平衡是为了让细胞尽快适应培养箱环境，同时使部分因运输导致脱落的细胞贴壁，此步骤非常必要。T2*瓶如果在显微镜下可以看到部分不贴壁的细胞，可以收集上清后离心（*200rpm，*min）后，将沉淀用新的培养基重悬后接种至新的培养瓶或皿中。
部分细胞在运输过程中，由于不断震荡及环境不适，可能导致细胞破碎死亡，从而使培养基中漂浮很多细胞碎片及颗粒状物质。这种情况下，平衡后，贴壁细胞用PBS洗两遍再加新的培养基培养或者传代至新瓶中培养即可；悬浮细胞可以离心（*000rpm，*min）收集细胞，并用PBS重悬后再离心一次，再用新的培养基重悬并接种细胞。"