仅供科研使用，不得用于临床检验。

人B型流感病毒IgM抗体（FLU B IgM）定性检测试剂盒（ELISA）

说明书

货号：INS-I2-00*

使用前，请务必仔细阅读说明书，如有不清楚的，请咨询清楚再进行实验。

【产品名称】

通用名称：人B型流感病毒IgM抗体定性检测试剂盒（ELISA）

英文名称：Human FLU B IgM ELISA KIT

【包装规格】

48人份/盒，*6人份/盒

【预期用途】

仅供科研使用，定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中是否含有人B型流感病毒IgM抗体。

【检验原理】

本试剂盒采用间接法酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被人B型流感病毒IgM抗体抗原（固相抗原，货号：INS-I2-00*C）的微孔酶标板中，加入人B型流感病毒IgM抗体阴阳性性对照（货号：INS-I2-00*J）和待测样本，温育洗涤，再加入另一株HRP标记的抗人IgM抗体（酶标抗体，货号：INS-I2-00*E），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗原-抗体-酶标抗体的夹心复合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中人B型流感病毒IgM抗体的浓度正相关，通过计算公式判断样品阴阳性。

【主要组成成分】

主要成分

组分	数量	主要成分
阴性对照	0.*ml/管	不含待测物的缓冲液
阳性对照	0.*ml/管	含待测物的缓冲液
包被微孔板	*6T	预包被固相抗原
HRP标记抗体	6mL	HRP标记的检测抗体
底物液A	6mL	过氧化脲工作液
底物液B	6mL	TMB工作液
20×浓缩洗涤液	*0mL	含0.**%Tween20的PBS
说明书	*份	--
自封袋	*个	--
不干胶	2片	--

阴阳性对照已经通过测试，结果表明HBs抗原阴性，HIV*、HIV2和HCV抗体阴性，由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质，本品必须按照具有潜在的感染性进行处理，处理过程应当遵循通用的安全措施。

需要但未提供的材料及耗材

*、酶标仪

2、精密移液器及一次性吸头

*、蒸馏水

4、洗瓶或者自动洗板机

*、**℃水浴锅或恒温箱

6、*00ml量筒

*、无粉一次性乳胶手套

8、质控品（可以从艾恩斯生物选择，货号：INS-I2-00*Q）

【储存条件及有效期】

*、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。

2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。

*、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和HRP标记抗体，有效期为28天，其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。

【适用仪器】

半自动的酶标仪，如Thermo MK*，或者国产酶标仪。

【样本要求】

样本类型和采集

以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。

*、细胞培养上清：4000rpm条件下离心20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反复冻融。

2、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm条件下离心20min，小心地分离出血清，保存在- 20℃以下，避免反复冻融。

*、血浆：肝素，EDTA，或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下，离心20分钟取上清，血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。

样本保存和稳定性

样本在2-8℃条件下，可以储存*2h，或者在- 20℃储存6个月。样本收集后，不是一次检测完，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻。

【检验方法】

试剂准备

*、使用前，所有的组分都要至少复温2h，确保充分复温到室温。

2、浓缩洗涤液：从冰箱取出的浓缩洗涤液，会有结晶产生，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水，按*:20稀释，即*份的浓缩洗涤液，添加**份的蒸馏水。

*、底物：底物液A和B，在使用前，按*:*体积充分混合，混合后**分钟内使用。

操作程序

*、所有试剂和组分都先恢复到室温，标准品、质控品和样品，建议做复孔。

2、按前面试剂准备中描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。

*、从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。

4、设置阴阳性对照孔、样本孔，阴阳性对照孔各加对照品*0μL，样本孔加样本*0μL。

*、用封板膜盖住反应板，**℃水浴锅或恒温箱温育60min。

6、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置20s，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复4次（共洗板*次）。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。

*、所有孔加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体*00μL。

8、用封板膜盖住反应板，**℃水浴锅或恒温箱温育*0min。

8、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置20s，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复4次（共洗板*次）。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。

*、将底物A和B按*:*体积充分混合，所有孔中加入底物混合液*00μL。用封板膜盖住反应板，**℃水浴锅或恒温箱温育**min。

*0、所有孔加入终止液*0μL，在酶标仪上读取各孔吸光度（OD值）。

【检验结果的解释】

检测完成后，以阴性对照的OD+0.2*，做为阈值，样本OD值大于阈值，为阳性；样本OD值低于阈值为阴性。

【检验方法的局限性】

*、仅供科研使用，不得用于临床诊断。

2、在试剂盒标示的有效期内使用，过期产品不得使用。

*、跟其他厂家的试剂盒或者组分不能混用。

4、使用试剂盒配套的样品稀释液。

*、如果样本值高于*标准品浓度值，请将样本适当稀释后，再重新测定。

6、待测样本中存在的人抗鼠等异嗜抗体会干扰检测结果，检测前，请排除该因素。

*、通过其他方法得到的检测结果，与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性。

【产品性能指标】

*、物理性能

试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装，无破损漏气。

2、阴性结果

阴性对照的OD值不高于0.2。

*、阳性结果

阳性对照的OD值不低于0.8。

4、特异性

本试剂盒识别天然和重组人B型流感病毒IgM抗体，与结构类似物无交叉。

*、稳定性

2℃-8℃保存，有效期6个月。

【注意事项】

生物安全

*、检测必须符合实验室管理规范的规定，严格防止交叉污染，所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置。

2、试剂盒的液体组分中，含有proclin-*00防腐剂，可能引起皮肤过敏反应，避免吸入烟雾与皮肤接触。

*、底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入烟雾。戴上防护手套，实验完成后彻底洗手。

技术提示

*、混合蛋白溶液时，避免起泡。

2、加校准品与样本时，每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头，公共组分应该悬臂加样，避免交叉污染。

*、合适的温育时间，和充分的洗涤步骤，是保证实验结果准确性的必要条件。

4、底物溶液为无色液体，保存过程中变为蓝色，代表底物溶液已经失效，不得使用。

*、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致，加入终止液后，蓝色底物产物，会瞬间变为黄色。

6、实验中，用剩的板条，应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

*、所有液体组分，使用前充分摇匀，严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。

废物处理

所有使用或未使用的试剂，所有污染性的一次性材料，应当遵循传染性或潜在传染性产品的处理程序，每个实验室都有责任根据其实验的类型和危险性级别，进行废物和污物的处理，同时要严格依照有关规定对待所有的废物和污物。