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免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)技术是检测蛋白质间相互作用的经典方法, 其基本原理是以细胞内源性靶蛋白为诱饵,将靶蛋白抗体与细胞总蛋白进行共孵育,促进免疫复合物的形成;随后加入能够与抗体Fc段结合的prorein A/G(预先结合固化在琼脂糖小珠上),形成“结合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗体-proteinA/G小珠”复合物,纯化该复合物后凝胶电泳分离蛋白,应用Western blot 或者质谱技术鉴定靶蛋白的结合蛋白。
与其它研究方法相比,免疫共沉淀*的优势在于该体系是在生理条件下检测蛋白质之间的相互作用,因此,不仅可以检测到体内形成的天然复合体,而且可排除过表达靶蛋白所带来的假阳性。其次内源性的靶蛋白质是完全加工、修饰和成熟的蛋白质,因此,依赖于修饰的蛋白质相互作用也能被检测到。
主要实验步骤:
*、构建表达
2、共转细胞
*、收集并裂解细胞
4、加入蛋白A/G和抗体共同孵育
*、Westernblot检测
服务须知:
由客户提供已构建好的目的基因表达质粒和抗体,如果不能提供构建好的表达质粒,则提供基因序列,由我公司提供克隆技术服务,须加收克隆服务费用。
我公司有多种带标签的质粒可供选择:myc, HA, n-flag, GFP等。
技术服务完成后向客户提供详细的实验报告、测序单、质粒和X光胶片。
博舜联合医学实验中心是一所由复旦大学,华东师范大学,生命科学研究所,上海市调控生物学重点实验室,中国科学院上海药物研究所等同道精英共同打造的一站式医学实验服务平台。我们的顾问团队来自清华大学、复旦大学,交通大学,浙江大学、中山大学、华东师范大学、中国科学院上海药物研究所、德克萨斯农工大学、哈佛医学院、贝勒医学院等知名高校和研究机构的生命科学领域专家、学者组成。
主要致力于免疫学、分子生物学、病理、病理分子生物、代谢组学、生物化学技术在科研中的应用与推广,专业从事生命科学、药物领域及相关产品的引进、服务和研发。通过高度细分、全方位的服务平台,向广大客户提供医学科研样本检测、合作研究、开发及生产。
市场业务遍布国内外,目前服务过上海交通大学、复旦大学、浙江大学,中山大学,中山大学湘雅医学院,北京军事医学科学院,中国协和医科大学,上海生命科学研究所,中科院上海生化与细胞生物学研究所,瑞金医院,上海市*人民医院,上海第九人民医院、中科院上海药物研究所、长海医院、瑞金医院等知名高校及科研机构。已发表的SCI文章和协助发表SCI文章,国家核心期刊近百余篇,文章涉及临床医学、免疫学、细胞生物学、分子生物学等生命科学诸多领域,实验方法涉及普通PCR、荧光定量PCR(real-time PCR)、Western印迹、流式、ELISA、免疫组化、细胞培养、MTT、放免、实验动物饲养及造模、基因敲除等。
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