大鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫ELISA试剂盒货号：QY-R28**
类别：酶联免疫分析检测试剂盒
规格：*6T/48T
包装：盒
检测原理：采用双抗夹心法
保质期：六个月
产品保存条件：2-8°C
应用范围：仅供科研研究实验使用
样品形式：血清/血浆/组织匀浆/细胞培养上清/其它生物液体（具体情况请咨询）
标本的采集及保存
*.血清：室温血液自然凝固*0-20分钟后，离心20分钟左右（2000-*000转/分）。仔细收集上清。保存  过程 中  如有沉淀形成，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合*0-20分钟后，离心20分钟左右（2000-*000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
*.尿液：用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-*000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-*000转/ 分）。仔细收集上清。  检测细胞内的成份时，用PBS（PH*.2-*.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到*00万/ml左右。通过反复冻融，以 使细胞破坏并 放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-*000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
*.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH*.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH*.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-*000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
标本要求： 
*．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN*的样品，因NaN*抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
需要自备的试剂和器材
*.**℃恒温箱。
2.标准规格酶标仪。
*.精密移液器及一次性吸头
4.蒸馏水，
*.一次性试管
6.吸水纸
大鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫ELISA试剂盒操作步骤
*、标准品的稀释：在酶标包被板上设标准品孔*0孔，在*、第二孔中分别加标准品*00μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液*0μl，混匀；然后从*孔、第二孔中各取*00μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液*0μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取*0μl弃掉，再各取*0μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液*0ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取*0μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液*0μl，混匀后从第七、第八孔中分别取*0μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液*0μl，混匀后从第九第十孔中各取*0μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为*0μl，浓度分别为*mmol/L，6 mmol/L，* mmol/L，*.*mmol/L， 0.** mmol/L）。
2、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品*0μl（样品最终稀释度为*倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
*、温育：用封板膜封板后置**℃温育*0分钟。
4、配液：将*0（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水*0（48T的20倍）倍稀释后备用。
*、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置*0秒后弃去，如此重复*次，拍干。
6、加酶：每孔加入酶标试剂*0μl，空白孔除外。
*、温育：操作同*。
8、洗涤：操作同*。
*、显色：每孔先加入显色剂A*0μl，再加入显色剂B*0μl，轻轻震荡混匀，**℃避光显色**分钟. 
*0、终止：每孔加终止液*0μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
**、测定：以空白空调零，4*0nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后**分钟以内进行。
洗板方法
手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.**ml注入孔内，浸泡*-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
注意事项：
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡**-*0分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间*控制在*分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
请每次测定的同时做标准曲线，*做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请*乘以总稀释倍数（×n×*）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
底物请避光保存。
严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
本试剂不同批号组分不得混用。
大鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫ELISA试剂盒如与英文说明书有异，以英文说明书为准。