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pcr检测常见的问题有什么

pcr检测常见的问题有:假阴性、阴性、假阳性、出现非特异性扩增带、出现片状拖带或涂抹带。
pcr检测常见的问题有什么

        pcr检测将DNA进行扩增,直至到实验所需的数量,这种方式可以方便于实验人员对实验物进行结构和功能的分析。PCR检测这一方法在临床上对于准确的诊断细菌性传染病等相关疾病有着非常重要的作用。那么pcr检测常见的问题有什么呢?

        主要有以下几点:

        1、假阴性,不出现扩增条带。PCR检测的过程中,有好几个关键的条件,其中但凡有一个产生误差,都是很容易引起假阴性的反应出现的,比如:模板核酸的制备、引物的质量与特异性、酶的质量及溴乙锭的使用、PCR循环条件等因素。所以在试验过程中需要谨慎操作。

        2、阴性。如果出现阴性反应,那么就需注意是不是忘加Taq酶或溴乙锭。第二是引物,包括检查引物的质量、引物浓度、两条引物浓度是否对称。第三要注意反应体积的改变:通常应用多大体积进行PCR扩增,是根据不同目的而设定,在小体积改变为大体积时,一定要摸索条件,否则容易失败。

        3、假阳性。出现这一现象的原因常因为引物设计不合适:比如扩增序列有同源性,靶序列或引物太短,容易出现假阳性,所以需重新设计引物。或者是因为靶序列或扩增产物的交叉污染,比如整个基因组的交叉污染,也会导致假阳性的出现。

        4、出现非特异性扩增带。非特异性条带的出现,一是引物与靶序列不互补、或引物形成二聚体。二是Mg2+离子浓度高、退火温度低、PCR循环次数过多

        5、出现片状拖带或涂抹带。往往由于酶过多或质量差、Mg2+浓度过高、循环次数过多、dNTP浓度过高、退火温度过低引起。

        Pcr检测过程中需要认真对待每一个过程,不要疏忽大意。

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