细胞冻存在生物实验中是一件很有必要的事情，很多时候为了可以将细胞保种，必须要就将细胞冻存起来，不让外物污染或者进行繁殖。细胞的暂时冻存有时候可以用于购买、运输、寄送等，这样就可以在运送过程中，保证细胞最大的完整性。那么暂时冻存细胞的操作步骤是什么呢？

        主要步骤如下：

        1、首先要配制含10%DMSO或者是甘油、10～20%小牛血清的细胞冻存培养液；

        2、然后取对数生长期的细胞，去除旧的培养液，用PBS进行清洗；

        3、去除PBS之后，加入适量放入胰蛋白酶，主要是为了把单层生长的细胞消化下来；

        4、开始进行离心1000rpm，5分钟的时间；

        5、去除掉胰蛋白酶，然后再加入适量配制好的冻存液。然后需要用吸管轻轻的吹打使细胞可以分布均匀，额庵后开始计数，冻存液中细胞的最终密度应该是为5×106/ml～1×107/ml，所以尽量要调整好这个密度；

        6、将细胞分别的装入冻存管内，每管1～1.5 ml的量；

        7、在冻存管上需要标明冻存细胞的名称，冻存的时间，还有实验操作者；

        8、冻存：一般的标准冻存程序为降温的速率每分钟-1～-2℃；当温度达-25℃以下时，可增至每分钟-5℃～-10℃；等温度到-100℃时，可迅速浸入液氮中。

        那么如果是暂时的冻存细胞，可将装有细胞的冻存管放入-20℃的冰箱内两个小时的时间，然后再放入-70℃的冰箱中进行过夜。如果需要使用，那就消融细胞即可，如果不需要使用，那就取出冻存管，再移入到液氮容器内即可。其实细胞在液氮中的冻存从理论上来说，时间可以无限长，如果需要使用的时候，随时取出即可。但是液氮的温度过低，需要注意防止冻伤。