基因敲除小鼠

博舜联合(上海)实验中心长期从事基因敲除/敲入大、小鼠相关工作,团队成员在Nature Biotechnology、Nature Protocol、Nucleic Acids Research等国际知名杂志发表高水平文章。本公司可通过Cas9、TALEN技术进行基因敲除大小鼠及条件敲除小鼠的制备工作,获得Founder仅需2个月、获得稳定遗传的F1代仅最快仅需4个月。如有需要欢迎来电咨询、交流。

一、CRISPR/Cas9技术简介

Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats(CRISPR)是细菌和古细菌为应对病毒和质粒不断攻击而演化来的获得性免疫防御机制,其中II型CRISPR/Cas免疫系统依赖Cas9内切酶家族靶向和剪切外源DNA。在这一系统中,crRNA(CRISPR derived RNA)通过碱基配对与tracrRNA(trans-activating RNA)结合形成双链RNA,此tracrRNA/crRNA二元复合体指导Cas9蛋白在crRNA引导序列靶定位点剪切双链DNA,其中Cas9的HNH核酸酶结构域剪切互补链,其RuvC-like结构域剪切非互补链。具体如下图所示:


研究表明,CRISPR/Cas9系统能够对小鼠和人类基因组特定基因位点进行精确编辑,这其中包括诱导多能干细胞 iPS等,不仅如此,CRISPR/Cas系统还可以同时针对同一细胞(ES)中的多个位点能实现多靶点同时酶切,人们运用该技术成功获得斑马鱼等模式动物基因敲除模型,使得多个基因敲除、敲入成为可能。

Cas9技术路线图:


二、TALEN技术简介

TALEN(transcription activator-like (TAL) effector nucleases)靶向基因敲除技术是一种崭新的分子生物学工具。研究发现,植物细菌Xanthomonas sp.的TAL蛋白的核酸结合域的氨基酸序列与其靶位点的核酸序列有恒定的对应关系。利用TAL的序列模块,可组装识别任意DNA序列的模块化蛋白和重组核酸酶,在特定位点打断目的基因DNA序列,进而在该位点进行DNA操作,如Knock-out、Knock-in或点突变。

TALEN技术路线图


三、服务项目及周期


1、靶点设计、载体构建、显微注射、Founder检测
2、提供3只以上F1代小鼠
3、Fouder仅需2个月、F1代最快仅需4个月

四、部分案例展示


Gene Name
Strains
KO/KI
Methods
Lepr
C57BL/6
KO
TALEN
Lepr
FVB/N
KO
TALEN
Pak1ip1
C57BL/6
KO
TALEN
Gpr55
FVB/N
KO
TALEN
Rprm
C57BL/6
KO
TALEN
Fbxo6
C57BL/6
KO
TALEN
Smurf1
C57BL/6
KO
TALEN
Tmem74
C57BL/6
KO
TALEN
Wdr20a
C57BL/6
KO
TALEN
Dcaf13
C57BL/6
KO
TALEN
Fam73a
C57BL/6
KO
TALEN
Th
FVB/N
KO
CRISPR-Cas
Th
B6
KO
CRISPR-Cas
Rheb
B6
KO
CRISPR-Cas
Uhrf2
FVB/N
KO
CRISPR-Cas
Mc3r
Sprague-Dawley
KO
CRISPR-Cas
Mc4r
Sprague-Dawley
KO
CRISPR-Cas
Lepr
Sprague-Dawley
KO
CRISPR-Cas



2014年10月9日
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