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大鼠核因子-κB亚基p65亲和肽(NF-κB p65)ELISA检测试剂盒

分类:诊断试剂 发布时间:2018-09-18 15:27 所在地:
234℃

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主要参数

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详细内容

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大鼠核因子-κB亚基p6*亲和肽(NF-κB p6*)ELISA检测试剂盒检测原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被大鼠核因子-κB亚基p6*亲和肽(NF-κB p6*)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠核因子-κB亚基p6*亲和肽(NF-κB p6*)呈正相关。用酶标仪在4*0nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法

*.  血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,*000转离心*0分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。*000转离心*0分钟取上清。

*.  细胞上清液:*000转离心*0分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。*000转离心*0分钟取上清。

*.  保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品

酶标仪(4*0nm)
高精度加样器及枪头:0.*-*0uL、2-20uL、20-200uL、200-*000uL
**℃恒温箱
操作注意事项

  试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
  实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
  预处理后的样本无需稀释,直接取*0μL加样即可。
  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
  所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成

名称

*6孔配置

48孔配置

备注

微孔酶标板

*2孔×8条

*2孔×4条



标准品(6管)

0.*ml/管

0.*mL/管



样本稀释液

6mL

*mL



检测抗体-HRP

*0mL

*mL



20×洗涤缓冲液

2*mL

**mL

大鼠核因子-κB亚基p6*亲和肽(NF-κB p6*)ELISA检测试剂盒按说明书进行稀释

底物A

6mL

*mL



底物B

6mL

*mL



终止液

6mL

*mL



封板膜

2张

2张



说明书

*份

*份



自封袋

*个

*个



注:

*、标准品浓度依次为:*200、600、*00、**0、**、**.* pg/mL.

2、在样本值超过标准品zui高浓度的情况下,可用样本稀释液适当稀释样本。

试剂的准备

 20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按*:20稀释,即*份的20×洗涤缓冲液加**份的蒸馏水。

洗板方法

  手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置*min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板*次。
  自动洗板机:每孔注入洗液**0μL,浸泡*min,洗板*次。
操作步骤

  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
  设置标准品孔、样本孔和空白孔,空白孔什么都不加;标准品孔各加不同浓度的标准品*0μL;
  待测样本孔各加待测样本*0μL;
  随后标准品孔和样本孔中(空白孔不加)加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体*00μL,,用封板膜封住反应孔,**℃水浴锅或恒温箱温育60min。
  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置*min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板*次(也可用洗板机洗板)。
  所有孔加入底物A、B各*0μL,**℃避光孵育**min。
  所有孔加入终止液*0μL,**min内,在4*0nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断

 绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。



试剂盒性能

*.  准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.**00。

2.  灵敏度:zui低检测浓度小于*.0 pg/mL。

*.  特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.  重复性:板内、板间变异系数均小于**%。

*.  贮藏:2-8℃,避光防潮保存。

6.  大鼠核因子-κB亚基p6*亲和肽(NF-κB p6*)ELISA检测试剂盒有效期:6个月
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