人蛋白基因产物*.*（PGP *.*） ELISA试剂盒检测范围：62.* ng/ml -4000 ng/ml
zui低检测限：**.6 ng/ml
特异性：本试剂盒可检测人 PGP *.*，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月
预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中 PGP *.*含量。
说明
l        试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
l        浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
l        中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
l        刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗Human PGP *.*抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗Human PGP *.*抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的Human PGP *.*. 呈正相关。用酶标仪在4*0nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制
*.        酶联板（Assay plate ）：                               一块（*6孔）。
2.        标准品（Standard）：                                 2瓶（冻干品）。
*.        样品稀释液（Sample Diluent）：                           *×20ml/瓶。
4.        生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：         *×*0ml/瓶。
*.        辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）： *×*0ml/瓶。
6.        生物素标记抗体（Biotin-antibody）：            *×*20μl/瓶（*：*00）。
*.        辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：     *×*20μl/瓶（*：*00）。
8.        底物溶液（TMB Substrate）：                           *×*0ml/瓶。
*.        浓洗涤液（Wash Buffer）： *×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释2*倍。
*0.    终止液（Stop Solution）：                    *×*0ml/瓶（2N H2SO4）。
需要而未提供的试剂和器材
*.        标准规格酶标仪
2.        高速离心机
*.        电热恒温培养箱
4.        干净的试管和Eppendof管
*.        系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，zui好用多通道移液器
6.    蒸馏水，容量瓶等
标本的采集及保存
*.        血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于*000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.        血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后*0分钟内于2 - 8° C *000 x g离心**分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
*.        细胞培养物上清或其它生物标本：*000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响zui后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
标本的稀释原则：
首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。zui后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。
标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至*ml，盖好后静置*0分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为4000 ng/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释4000 ng/ml，2000 ng/ml，*000 ng/ml，*00 ng/ml，2*0 ng/ml，*2*ng/ml，62.*ng/ml.样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml,，临用前**分钟内配制。
如配制2000ng/ml,标准品：取0.*ml（不要少于0.*ml）4000 ng/ml,的上述标准品加入含0.*ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
生物素标记抗体的稀释原则：
临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔*00μl），实际配制时应多配制0.*-0.2ml。如*0μl生物素标记抗体加**0μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：
临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔*00μl），实际配制时应多配制0.*-0.2ml。如*0μl辣根过氧化物酶标记亲和素加**0μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
人蛋白基因产物*.*（PGP *.*） ELISA试剂盒操作步骤
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
*.        加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液*00μl，余孔分别加标准品或待测样品*00μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，**℃反应*20分钟。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.        弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 *00μl（取*μl生物素标记抗体加**μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），**℃,60分钟。
*.        温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板*次，每次浸泡*-2分钟，200μl/每孔，甩干。
4.        每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液） *00μl，**℃，60分钟。
*.        温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板*次，每次浸泡*-2分钟，200μl/每孔，甩干。
6.        依序每孔加底物溶液*0μl，**℃避光显色（*0分钟内，此时肉眼可见标准品的前*-4孔有明显的梯度蓝色，后*-4孔梯度不明显，即可终止）。
*.        依序每孔加终止溶液*0μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.        用酶联仪在4*0nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后**分钟以内进行检测。
实验备注
l        用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
l      每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。
l        为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。
l        未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液、或辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。
l        建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.*ml注入孔内，浸泡*-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
计算
以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
人蛋白基因产物*.*（PGP *.*） ELISA试剂盒注意事项
l        底物请避光保存。
l        当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。
l        请每次测定的同时做标准曲线，zui好做复孔。
l        洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
l        不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。
l        一次加样时间zui好控制在*分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
l        在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
l        如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请zui后乘以稀释倍数。