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人脱氧胞苷激酶(DCK)ELISA试剂盒

分类:诊断试剂 发布时间:2018-08-08 14:55 所在地:
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人脱氧胞苷激酶(DCK)ELISA试剂盒检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预
先包被脱氧胞苷激酶(DCK)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标
准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终
的黄色。颜色的深浅和样品中的脱氧胞苷激酶(DCK)呈正相关。用
酶标仪在4*0nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品活性。
样品收集、处理及保存方法
*. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞
刺激,收集血液后,*000 转离心*0 分钟将血清和红细胞迅速小心地
分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。*000 转离心*0 分钟取上清。
*. 细胞上清液:*000 转离心*0 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。*000 转离心*0 分钟
取上清。
*. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于
-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
*. 酶标仪(4*0nm)
2. 高精度加样器及枪头:0.*-*0uL、2-20uL、20-200uL、200-*000uL
*. **℃恒温箱
操作注意事项
*. 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20 分钟。从冰箱取出的
浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解
后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。*. 浓度为0 的S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明
书操作时样本已经稀释* 倍,zui终结果乘以* 才是样本实际浓度。
严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
4. 所有液体组分使用前充分摇匀。
人脱氧胞苷激酶(DCK)ELISA试剂盒试剂盒组成
名称 *6孔配置 48孔配置 备注
微孔酶标板*2 孔×8 条*2 孔×4 条无
标准品0.*mL*6 管0.*mL*6 管无
样本稀释液6mL *mL 无
检测抗体-HRP *0mL *mL 无
20×洗涤缓冲液2*mL **mL 按说明书进行稀释
底物A 6mL *mL 无
底物B 6mL *mL 无
终止液6mL *mL 无
封板膜2 张2 张无
说明书* 份* 份无
自封袋* 个* 个无
注:标准品(S0-S*)浓度依次为:0、*0、20、40、80、*60 U/L
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按*:20 稀释,即* 份的20×洗涤缓
冲液加** 份的蒸馏水。
洗板方法
*. 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置*min 后甩尽
孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板* 次。
2. 自动洗板机:每孔注入洗液**0μL,浸泡*min,洗板* 次。
操作步骤
*. 从室温平衡20min 后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封
袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品*0μL;
*. 样本孔先加待测样本*0μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不
加。
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶
(HRP)标记的检测抗体*00μL,用封板膜封住反应孔,**℃水浴
锅或恒温箱温育60min。
*. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置*min,甩去
洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板* 次(也可用洗板机洗板)。6. 每孔加入底物A、B 各*0μL,**℃避光孵育**min。
*. 每孔加入终止液*0μL,**min 内,在4*0nm 波长处测定各孔的
OD 值。
结果判断
绘制标准曲线:在Excel 工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应
OD 值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样
本浓度值。
试剂盒性能
*. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R 值,大于等于
0.**00。
2. 灵敏度:zui低检测浓度小于*.0 U/L。
*. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性:板内、板间变异系数均小于**%。
*. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。
6. 人脱氧胞苷激酶(DCK)ELISA试剂盒有效期:6 个月
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