兔骨桥素(OPN)酶联免疫分析试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中兔骨桥素 (OPN)水平。用纯化的兔骨桥素(OPN)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入骨桥素  (OPN)，再与  HRP标记的骨桥素 (OPN)抗体结合，形成抗体 -抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在 HRP  酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的骨桥素(OPN)呈正相关。用酶标仪在 4*0nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中兔骨桥素(OPN)浓度。
操作步骤
*.  标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 *0μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 *0μl（样品zui终稀释度为 *倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
*.温育：用封板膜封板后置 **℃温育*0分钟。
4.配液：将 *0倍浓缩洗涤液用蒸馏水  *0倍稀释后备用
*.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 *0秒后弃去，如此重复 *次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂 *0μl，空白孔除外。
*.温育：操作同 *。
8.洗涤：操作同 *。
*.显色：每孔先加入显色剂 A*0μl，再加入显色剂 B*0μl，轻轻震荡混匀，**℃避光显色**分钟.
*0.终止：每孔加终止液    *0μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
**.测定：以空白空调零，4*0nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后 **分钟以内进行。
兔骨桥素(OPN)酶联免疫分析试剂盒注意事项
*．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 **-*0分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
*．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间zui好控制在 *分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，zui好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本  OD值大于标准品孔*孔的 OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×*）。
*．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
*．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
*．本试剂不同批号组分不得混用。
兔骨桥素(OPN)酶联免疫分析试剂盒保存条件及有效期
*．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月