鱼致病性气单胞菌酶联免疫分析试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鱼致病性气单胞菌表达。用纯化的鱼致病性气单胞菌抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中致病性气单胞菌相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的致病性气单胞菌抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。用酶标仪在4*0nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中鱼致病性气单胞菌的存在与否。
标本要求
*．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN*的样品，因NaN*抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
*.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照*孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）


2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照*0μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品*0μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，
*.温育：用封板膜封板后置**℃温育*0分钟。
4.配液：将*0倍浓缩洗涤液用蒸馏水*0倍稀释后备用
*.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置*0秒后弃去，如此重复*次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂*0μl，空白孔除外。
*.温育：操作同*。
8.洗涤：操作同*。
*.显色：每孔先加入显色剂A*0μl，再加入显色剂B*0μl，轻轻震荡混匀，**℃避光显色**分钟.
*0.终止：每孔加终止液*0μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
**.测定：以空白空调零，4*0nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后**分钟以内进行。

鱼致病性气单胞菌酶联免疫分析试剂盒操作程序总结：


计算和结果判定：
试验有效性：阳性对照孔平均值≥*.00; 阴性对照平均值≤0.*0
临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.**
阴性判定：样品OD值< 临界值（CUT OFF）者为致病性气单胞菌阴性
阳性判定：样品OD值≥ 临界值（CUT OFF）者为致病性气单胞菌阳性
。
鱼致病性气单胞菌酶联免疫分析试剂盒注意事项
*．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。
2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡**-*0分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
*．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
*．底物请避光保存。
6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为6*0nm
*．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。
鱼致病性气单胞菌酶联免疫分析试剂盒保存条件及有效期
*．试剂盒保存：2-8℃。
2．有效期：6个月