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天成医疗网首页> 供应信息> 诊断试剂> N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(OGT)ELISA试剂盒

N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(OGT)ELISA试剂盒

分类:诊断试剂 发布时间:2018-05-15 16:07 所在地:
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主要参数

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N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(OGT)ELISA试剂盒实验原理:

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(OGT)水平。用纯化的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(OGT)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(OGT),再与HRP标记的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(OGT)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(OGT)呈正相关。用酶标仪在4*0nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(OGT)浓度。

试剂盒组成:

试剂盒组成

48孔配置

*6孔配置

保存

说明书

*份

*份



封板膜

2片(48)

2片(*6)



密封袋

*个

*个



酶标包被板

*×48

*×*6

2-8℃保存

标准品:*60pg/mL

0.*ml×*瓶

0.*ml×*瓶

2-8℃保存

标准品稀释液

*.*ml×*瓶

*.*ml×*瓶

2-8℃保存

酶标试剂

* ml×*瓶

6 ml×*瓶

2-8℃保存

样品稀释液

* ml×*瓶

6 ml×*瓶

2-8℃保存

显色剂A液

* ml×*瓶

6 ml×*瓶

2-8℃保存

显色剂B液

* ml×*瓶

6 ml×*瓶

2-8℃保存

终止液

*ml×*瓶

6ml×*瓶

2-8℃保存

浓缩洗涤液

(20ml×20倍)×*瓶

(20ml×*0倍)×*瓶

2-8℃保存


N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(OGT)ELISA试剂盒样本处理及要求:

*. 血清:室温血液自然凝固*0-20分钟,离心20分钟左右(2000-*000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合*0-20分钟后,离心20分钟左右(2000-*000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

*. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-*000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-*000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH*.2-*.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到*00万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-*000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

*. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH*.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH*.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-*000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.

*. 不能检测含NaN*的样品,因NaN*抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤

标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔*0孔,在*、第二孔中分别加标准品*00μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液*0μl,混匀;然后从*孔、第二孔中各取*00μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液*0μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取*0μl弃掉,再各取*0μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液*0ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取*0μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液*0μl,混匀后从第七、第八孔中分别取*0μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液*0μl,混匀后从第九第十孔中各取*0μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为*0μl,浓度分别为240 pg/mL,*60pg/mL , 80 pg/mL,40pg/mL, 20 pg/mL)。
加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品*0μl(样品最终稀释度为*倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
温育:用封板膜封板后置**℃温育*0分钟。
配液:将*0(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水*0(48T的20倍)倍稀释后备用。
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置*0秒后弃去,如此重复*次,拍干。
加酶:每孔加入酶标试剂*0μl,空白孔除外。
温育:操作同*。
洗涤:操作同*。
显色:每孔先加入显色剂A*0μl,再加入显色剂B*0μl,轻轻震荡混匀,**℃避光显色**分钟. 
终止:每孔加终止液*0μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
测定:以空白空调零,4*0nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后**分钟以内进行。
注意事项:

试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡**-*0分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间*控制在*分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
请每次测定的同时做标准曲线,*做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请*乘以总稀释倍数(×n×*)。
封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
底物请避光保存。
严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(OGT)ELISA试剂盒本试剂不同批号组分不得混用。
*0. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。


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