NCI-H****细胞复苏人肺癌腺癌 "

造成实验室细胞污染常见情况总结：
细胞培养中最常见污染的是细菌、真菌和支原体污染。细胞一旦污染，大多数较难处理。那么，哪些情况我们不注意的话就会造成细胞污染呢？我们根据常见细胞培养实验分析总结下。
违规操作：*. 为节省时间，有人已经用超净台四个多小时，不开紫外灭菌*0min,酒精擦拭后直接开始试验。2. 器材或者溶液很久没用，未检测是否污染而直接使用；离心管多次使用，枪头为了方便交叉使用。*. 超净台不点酒精灯；点了酒精灯放在右上角，而你在左下角做试验。4. 不带手套，徒手操作。*. 细胞培养间配备枪式移液器、手术器械、离心机、冰箱等专用仪器设备以及专用的实验服和拖鞋，未定期消毒。专用物品被带出细胞房使用。培养细胞过程中使用的所有实验用具，如移液管、一次性枪头、一次性塑料离心管、冻存管等未按要求灭菌使用（通常需*2*°C高压灭菌20分钟后**％烤干备用）。
超净台和桌面，东西太多太乱：超净台不是储物箱，什么培养皿、各种规格的板子、枪头就不要堆在超净台！这样就会有许多紫外线顾不到的卫生死角。细胞房其他的桌面，切忌东西堆积如山，不要将酒精棉球、标签纸、牛皮纸买来后全部堆在细胞房！一不小心“飘”进你的细胞培养板里，细胞就会养的不好，啥时候死了都不知道！
培养箱太久没清洁：细胞污染了，并非直接扔了培养皿就不管了，首先你还得看看这个恒温培养箱里其他培养皿或孔板里的细胞是否污染，如果有而且好几个板子都有类似的污染块，那很可能是培养箱中的水或者空气污染了，得给培养箱做个大扫除，重新酒精消毒，照紫外；孵箱里的水，水没了要记得加，还得记得十天半个月的就用酒精擦擦托盘。
细胞房人多口杂，难管理：在细胞房这种卫生要求高，人多了，不确定因素多了，难以保证试验在无菌条件下操作。出入试验室，实验服当风衣穿，不扣纽扣，不戴鞋套，就容易造成细胞污染；超净台做实验时，喜欢说话聊着做试验，要是还不带口罩，里面就有很多细菌等着去攻击你的细胞呢！" "

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实验细胞培养基常见问题总结：
培养基是细胞培养中不可缺少的营养成分，但是最基础的培养基却给实验者带来了一系列的问题。别小看细胞培养，这里可蕴含着大大的学问。有时候细胞状态不好，接下来的一系列实验根本就没法做。影响细胞培养的因素很多，那就先从培养基开始说起。
培养基常见问题：
*.怎样查到一个特定细胞株的相关知识和培养条件？ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外*大学细胞库收集了绝大多数细胞的详细资料。细胞数据库中有每一种细胞的详细描述，包括细胞的来源，培养和冻存条件，以及相关文献等资料。
2.液体培养基可以放-20℃保存吗？不可以！因为在-20℃下，培养基中的盐容易析出，培养基融化后，有的盐可能无法重新溶解，从而导致培养基渗透压降低，培养细胞时，细胞容易破裂而死亡。
*.自己新配制的液体培养基能保存多久？我们建议将新配制的培养基放置于4℃，避光保存尽量在一周内使用完毕。培养基越新鲜越好。
4.培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗？一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。
*.培养基中是否须添加抗生素？除了特殊筛选系统外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。为防止细菌、真菌污染，可以加入青霉素-链霉素双抗溶液，其培养基中的终浓度为青霉素*00U/ml，链霉素为*00ug/ml。
6.为何培养基保存于4℃冰箱中，颜色会偏暗红色，且pH值越来越偏碱性？培养基保存于4℃冰箱中， 培养基内之CO2 会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。而培养基中之酸碱指示剂(通常为phenol red) 的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱之结果， 将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时，可以通入无菌过滤之CO2，以调整pH值。
*.培养液pH是怎样影响细胞生长的？由于大多数细胞适宜PH值为*.2-*.4，偏离此范围对细胞将产生有害的影响。各种细胞对PH值要求也不完全相同，原代细胞培养一般对PH值变动耐受差，无限细胞系耐受力强。但总体来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些，偏酸环境中更有利于细胞的生长。因此，配制培养用液时可把液体的PH值稍微调的偏酸一些。液体在经过0.*um或0.2um滤膜过滤时，PH值会向上浮动0.2左右。
8.培养液渗透压是怎样影响细胞生长的？当细胞内、外环境的分子浓度不同时就会产生渗透压。这种情况下，水分通过渗透流入或流出细胞，从而改变细胞的内环境。高渗透压迫使水分从细胞中扩散出来导致细胞收缩，这种情况会使DNA和蛋白遭到破坏，细胞周期停滞以及最终使细胞死亡；反之，低渗透压使水分流入细胞内，使细胞肿胀破裂。
*.为什么液体培养基*640有时候颜色发黄，是pH值不对吗？不是。因为配方原因，*640为碱酚红型，其中酚红的浓度只有DMEM的四分之一，所以是因为酚红浓度低，而非PH值低。
*0.为什么有客户要求培养基中不含酚红？研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，细胞培养，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加酚红的培养基。" NCI-H****细胞复苏人肺癌腺癌 "

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几种实验室细胞培养基成分的作用：
*.NaHCO*的作用是什么？与CO2一起形成缓冲系统，保持培养基PH值稳定。
2.丙酮酸钠的作用是什么？丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。
丙酮酸钠的贮存液浓度一般为*0mM，-20℃保存，培养基中的终浓度为*mM.
*.加入HEPES有何好处？培养基中最常用的Buffer system是碳酸氢盐，它可提供营养，但却在生理PH值条件下会降低缓冲能力。而HEPES是一种很强的Buffer，加入HEPES能使细胞培养基在PH*.2-*.6条件下缓冲能力增强。Hepes的贮存液浓度一般为*M，常温保存。培养基中的终浓度为2*mM，即*ml *M的Hepes加入到200ml完全培养基中。
4.酚红的作用是什么？酚红在培养基中被用来作为PH值指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。
*.谷氨酰胺的作用是什么？几乎所有的细胞对谷氨酰胺都有胶高的要求。谷氨酰胺脱掉氨基后，可作为培养细胞的能量来源，参与蛋白质的合成和能量代谢。在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。所以，各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。
谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置-20℃冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4度冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。
试验操作中常配制高浓度（*00倍）的谷氨酰胺溶液（*ml/支），分装使用，-20℃保存。使用时，每支*ml的谷氨酰胺加入到**ml完全培养基中，使其终浓度为2mM培养基。" "

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