人细胞角蛋白**ELISA检测试剂盒试验原理：
CK-**试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知CK-**浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将CK-**和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中CK-**的浓度呈比例关系。
自备材料
*．蒸馏水。
2．加样器：*ul、*0ul、*0ul、*00ul、200ul、*00ul、*000ul。
*．振荡器及磁力搅拌器等。
安全性
*．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
*．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项
*．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
*．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
*．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
*．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
*．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
人细胞角蛋白**ELISA检测试剂盒样品收集、处理及保存方法
*、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，*000×g离心*0分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。*000×g离心*0分钟去除颗粒。
*、细胞上清液---*000×g离心*0分钟去除颗粒和聚合物。
4、保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-*0 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在**℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
试剂的准备
标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。

2．洗涤缓冲液（*0×）的稀释：蒸馏水*0倍稀释。
人细胞角蛋白**ELISA检测试剂盒操作步骤
*．使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
*．加入稀释好后的标准品*0ul于反应孔、加入待测样品*0ul于反应孔内。立即加入*0ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，**℃温育*小时。
4．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡*0秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作*次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
*．每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，**℃温育*0分钟。
6．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡*0秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作*次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
*．每孔加入底物A、B各*0ul，轻轻振荡混匀，**℃温育*0分钟。避免光照。
8．取出酶标板，迅速加入*0ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
*．在4*0nm波长处测定各孔的OD值。
局限
6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。
试剂盒性能
*. 灵敏度：最小的检测浓度小于*号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.**0。
2. 特异性：不与其它细胞因子反应。
*. 重复性：板内、板间变异系数均小于*0%。
人细胞角蛋白**ELISA检测试剂盒结 果 判 断 与 分 析
*、仪器值：于波长4*0nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的CK-**标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的CK-**含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
*、检测值范围：0-4.0ng/ml
4、敏感度： 0.0* ng/ml