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传代培养及其操作步骤：
原代细胞培养成功以后，需要进行分离培养，否则细胞会因生存空间不足或密度过大，营养障碍，影响细胞生长。细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶中培养的过程称之为传代培养。传代细胞允许培养的细胞扩增(形成细胞株)，可以进行细胞克隆，易于保存，但可能丧失一些特殊的细胞和分化特征。传代细胞形成细胞株的*利处在于提供了大量持久的实验材料，便于实验。
*.操作步骤
（*）吸掉或倒掉培养瓶内旧培养液。
（2）向瓶内加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆盖培养瓶底为宜。
（*）置**℃孵箱或室温（2*℃温度）下进行消化，2~*min后把培养瓶放在倒置显微镜下进行观察，当发现胞质回缩、细胞间隙增大后，应立即中止消化。
（4）吸出消化液，向瓶内加入Hanks液少量，轻轻转动培养瓶，把残留消化液冲掉，然后再加培养液。如果仅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培养液，终止消化。
（*）使用弯头吸管，吸取瓶内培养液，按顺序反复轻轻吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。吹打时动作要轻柔，以防用力过猛损伤细胞。
（6）用计数板计数后，分别接种于新的培养瓶中，置CO2培养箱中进行培养。
（*）细胞培养换液时间应根据细胞生长的状态和实验要求来确定。一般2～*d后应换一次生长液。待细胞铺满器皿底面，即可使用；也可继续传代扩大培养或换成维持液。
2.注意事项
（*）掌握好细胞消化的时间，消化时间过短时，细胞不宜从瓶壁脱落，过长的消化会导致细胞脱落、损伤。
（2）掌握好消化浓度，当消化液浓度过高时，消化时间应缩短，过低时细胞消化时间相对延长。
体内细胞培养及其操作步骤：
*． 瘤细胞悬液接种
（*）无菌选取生长良好(有光泽，淡红色)瘤组织或对数生长期培养瘤细胞。
（2）在PBS中将瘤组织剪碎后用匀浆器研磨，经80～*00目筛网过滤成细胞悬液。
（*）培养细胞应用PBS洗两遍。
（4）计数并调整细胞浓度至*0*～*08／ml。
（*）常规消毒后，于接种部位(通常为背部或腋窝腹股沟皮下)用医用注射器皮下潜行一段后注入细胞悬液(0.*ml／部位，＞*06细胞)。初次接种成功率低，细胞数尽可能多一些。
（6）次日注意观察动物一般情况。初次接种一般有一段较长的潜伏期，以后随着传代潜伏期逐渐缩短，*固定为一个相对稳定的时间。
2． 腹水瘤的建立与腹水瘤的接种 将实体瘤细胞直接种于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤细胞，将这种腹水反复传代，即可成为腹水瘤。初次传代时，腹水常呈血性(含大量红细胞)，反复传代后腹水逐渐变成乳白色。腹水瘤的接种过程如下。
（*）将冻存或培养的腹水瘤细胞离心和洗涤，进行细胞计数。
（2）消毒动物，左下腹穿刺接种*06腹水瘤细胞。
（*）接种腹水瘤细胞后约*~*2d，待小鼠腹部明显膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用*号针头抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽*~*ml。
（4）抽取的腹水经*000rpm离心**min，收集上清，分装冻存备用。" "

实验室细胞培养经验分享：
启蒙老师的重要性：一般进实验室都有师兄师姐带着做，他们就是你做细胞的启蒙老师。他们的操作手法、细节、理论讲解就成了你操作的准则，如营养液、细胞瓶的摆放位置；灭菌处理程序；开盖手法；细胞吹打手法等等。要学会他们的正确操作，在*次的时候就要重视。
像养孩子一样养细胞：细胞真的很脆弱，*每天都去看看它，以防止出现培养箱缺水、缺二氧化碳、停电、温度不够等异常现象，也好及时解决这些意外，避免重复实验带来的更大痛苦。
好细胞要及时保种：细胞要分批传代，这样即使有一批出了问题，还有一批备用的。像后者一般人可能不容易做到。但这是我血的教训，有一次细胞污染了，全军覆没。当时可后悔没有保种。
每种细胞都有自己的特性，要区别对待：细胞跟人一样，不同的细胞，培养特性是不一样的。培养过程中要细细体会。不同细胞株使用不同的培养基和血清。
如我养的平滑肌细胞很活跃，喜欢热闹，2~*天就好多人口，而且不太爱吃喝，真是*养的孩子了。内皮细胞和平滑肌细胞性格相近，不过它很不讲卫生，也很邋遢，里面有很多分泌屋，要经常换洗才行。RAW264.*细胞也很开朗，而且很能吃，要经常喂它，头疼的是细胞很容易活化，培养它的瓶子和环境没有内毒素才好，不过我这个当妈的很难满足它了。
培养前的工作准备充分：包括耗材的处理、试剂的配置，无菌检验等等。
玻璃器皿的清洗。对于玻璃器皿（细胞瓶、装营养液的瓶子、小青霉素瓶等）要先用洗衣粉刷干净（注意死角），然后冲干净。用酸液浸泡 24 h 以上，之后用清水冲洗 *0 遍，除去残留酸液。瓶子之类，冲洗过程要使劲摇晃。然后在双蒸水浸泡24h。晾干后包扎，*60℃干烤2h待用。
试剂配置。细胞培养用的液体一般使用双蒸以上的水即可。并注意pH值的调节。
无菌检验。主要采用过滤除菌：如胰酶、抗生素、G-4*8溶液、各类培养基、丙酮酸钠、谷氨酰胺等。有些可以采用高压灭菌：如PBS、D-Hank's等。
试剂分装保存：包括营养液、胰酶、血清等。
血清特别重要。血清必须贮存于–20℃，如果一次无法用完一瓶，可将40～*0ml分装于无菌酸处理瓶中，甚至置青霉素瓶保存。一般厂商提供的血清为无菌，不需再无菌过滤。若发现血清有许多悬浮物，则可将血清加入培养基内一起过滤，勿直接过滤血清。（一般情况下不影响细胞培养）" "

细胞培养相关培养基选购基本指南：
如何选择培养基：经常听到有人问，这种细胞该用哪一种培养基呢?其实这个问题的答案可以很简单，也可以好复杂。为什么这样说呢?如果这种细胞是购自一些细胞库，那很简单，问供应商就行了。或者找到相关的文献，作为参考。
培养基这么多种，要选择起来也是个头疼的事情。除了部分培养基是公开配方的，或者是专门针对某一种细胞的，如昆虫基本培养基和神经祖细胞基础培养基， 但是大部分液体培养基都是专利配方的，也就是说其中的成分是保密的。那么你只能是检索文献、让供应商推荐，然后用自己的细胞做几次传代培养来选出最合适的培养基。毕竟实践出真知。
怎么样才可以买到好的培养基产品：首先，当然需要找对品牌，其次是找对自己所在区域的品牌代理商，针对自己所养的细胞，咨询供应商该选用哪种的培养基进行培养，这样就可以买到好的而且适合自己的培养基产品。
关于培养基品牌，目前公司所知道的高校实验室有些同学在用Corning系列培养产品，也有同学在用Invitrogen(GIBCO)、Thermo Fisher(HyClone)等品牌的产品。
培养基的选择和使用
MEM：成分简单，贴壁细胞*。
DMEM：分高糖型和低糖型。
IDMEM：适合细胞密度低，生长困难的细胞。如杂交细胞的筛选，DNA转染后转化细胞的筛选培养。
RPM*640：应用最广泛的培养基之一。悬浮细胞培养*，主要针对淋巴细胞，也适合其他细胞。
***、*0*培养基：成分齐全，培养效果较好。
F*0培养基：适合小鼠及人类二倍体细胞培养。
F*2培养基：适合单细胞分离培养及无血清培养。
McCoy’s*培养基：特别适合原代细胞及较难培养细胞的生长。"