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人α-甲胎蛋白(α-AFP)酶联免疫分析试剂盒

分类:诊断试剂 发布时间:2018-03-12 16:43 所在地:
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人α-甲胎蛋白(α-AFP)酶联免疫分析试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人α-甲胎蛋白(α-AFP)水平。用纯化的人α-甲胎蛋白(α-AFP)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入α-甲胎蛋白(α-AFP),再与HRP标记的α-甲胎蛋白(α-AFP)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的α-甲胎蛋白(α-AFP)呈正相关。用酶标仪在4*0nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人α-甲胎蛋白(α-AFP)浓度。
试剂盒组成
*    *0倍浓缩洗涤液    20ml×*瓶    *    终止液    6ml×*瓶
2    酶标试剂    6ml×*瓶    8    标准品(*6μg/L)    0.*ml×*瓶
*    酶标包被板    *2孔×8条    *    标准品稀释液    *.*ml×*瓶
4    样品稀释液    6ml×*瓶    *0    说明书    *份
*    显色剂A液    6ml×*瓶    **    封板膜    2张
6    显色剂B液    6ml×*/瓶    *2    密封袋    *个
标本要求
*.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN*的样品,因NaN*抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
*.组织处理:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH*.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH*.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-*000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
人α-甲胎蛋白(α-AFP)酶联免疫分析试剂盒操作步骤
*.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样*0μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品*0μl(样品最终稀释度为*倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
*.温育:用封板膜封板后置**℃温育*0分钟。
4.配液:将*0倍浓缩洗涤液用蒸馏水*0倍稀释后备用
*.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置*0秒后弃去,如此重复*次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂*0μl,空白孔除外。
*.温育:操作同*。
8.洗涤:操作同*。
*.显色:每孔先加入显色剂A*0μl,再加入显色剂B*0μl,轻轻震荡混匀,**℃避光显色*0分钟.
*0.终止:每孔加终止液*0μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
**.测定:以空白空调零,4*0nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后**分钟以内进行。
人α-甲胎蛋白(α-AFP)酶联免疫分析试剂盒计算
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
注意事项
*.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡**-*0分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
*.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间*控制在*分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,*做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请*乘以总稀释倍数(×n×*)。
*.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
*.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
*.本试剂不同批号组分不得混用。
人α-甲胎蛋白(α-AFP)酶联免疫分析试剂盒保存条件及有效期
*.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6个月

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