牛（Cattle）抑肽酶 （Aprotinin） ELISA 检测试剂盒试验原理：
 Aprotinin试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知Aprotinin浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将Aprotinin和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中Aprotinin的浓度呈比例关系。
 
试剂盒内容及其配制
试剂盒成份（2-8℃保存） *6孔配置 48孔配置 配制
*6/48人份酶标板 *块板（*6T） 半块板（48T） 即用型
塑料膜板盖 *块 半块 即用型
标准品：800nmol/L *瓶（0.6ml） *瓶（0.*ml） 按说明书进行稀稀
空白对照 *瓶（*.0ml） *瓶（0.*ml） 即用型
标准品稀释缓冲液 *瓶（*ml） *瓶（2.*ml） 即用型
生物素标记的抗Aprotinin抗体 *瓶（6ml） *瓶（*.0ml） 即用型
亲和链酶素-HRP *瓶（*0ml） *瓶（*.0ml） 即用型
洗涤缓冲液 *瓶（20ml） *瓶（*0ml） 按说明书进行稀释
底物A *瓶（6.0ml） *瓶（*.0ml） 即用型
底物B *瓶（6.0ml） *瓶（*.0ml） 即用型
终止液 *瓶（6.0ml） *瓶（*.0ml） 即用型
标本稀释液 *瓶（*2ml） *瓶（6.0ml） 即用型
自备材料
蒸馏水。
加样器：*ul、*0ul、*0ul、*00ul、200ul、*00ul、*000ul。
振荡器及磁力搅拌器等。
安全性
避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项
试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
牛（Cattle）抑肽酶 （Aprotinin） ELISA 检测试剂盒样品收集、处理及保存方法
血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，*000×g离心*0分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。*000×g离心*0分钟去除颗粒。
细胞上清液---*000×g离心*0分钟去除颗粒和聚合物。
组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。*000×g离心*0分钟，取上清液
保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-*0 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在**℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
试剂的准备
标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：
800 nmol/L （6号标准品） 原倍浓度不用稀释直接加入*0ul。
400 nmol/L （*号标准品） *00ul的原倍标准品加入*00ul的标准品稀释液
200 nmol/L （4号标准品） *00ul的*号标准品加入*00ul的标准品稀释液
*00 nmol/L （*号标准品） *00ul的4号标准品加入*00ul的标准品稀释液
*0 nmol/L （2号标准品） *00ul的*号标准品加入*00ul的标准品稀释液
2* nmol/L （*号标准品） *00ul的2号标准品加入*00ul的标准品稀释液
0 nmol/L （空白对照） 原始浓度不用稀释直接加入*0ul。
洗涤缓冲液（*0×）的稀释：蒸馏水*0倍稀释。

操作步骤
使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液*：*稀释后加入*0ul于反应孔内。
加入稀释好后的标准品*0ul于反应孔、加入待测样品*0ul于反应孔内。立即加入*0ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，**℃温育*小时。
甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡*0秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作*次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，**℃温育*0分钟。
甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡*0秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作*次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
每孔加入底物A、B各*0ul，轻轻振荡混匀，**℃温育*0分钟。避免光照。
取出酶标板，迅速加入*0ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
在4*0nm波长处测定各孔的OD值。
建议使用的实验方案
 标准品浓度（nmol/L） 
A 800 800 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
B 400 400 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
C 200 200 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
D *00 *00 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
E *0 *0 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
F 2* 2* 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
G 0 0 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
H 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品

局限
6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。
试剂盒性能
 *. 灵敏度：最小的检测浓度小于*号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.**0。
2. 特异性：不与其它细胞因子反应。
*. 重复性：板内、板间变异系数均小于*0%。
牛（Cattle）抑肽酶 （Aprotinin） ELISA 检测试剂盒结 果 判 断 与 分 析
*、仪器值：于波长4*0nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的Aprotinin标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的Aprotinin含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
*、检测值范围：0-800nmol/L
4、敏感度： *.0 nmol/L