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牛(Cattle)抑制素A (Inhibin A)ELISA 检测试剂盒

分类:诊断试剂 发布时间:2017-12-15 16:30 所在地:
381℃

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牛(Cattle)抑制素A (Inhibin A)ELISA 检测试剂盒试验原理:
Inhibin A试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知Inhibin A浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将Inhibin A和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中Inhibin A的浓度呈比例关系。

试剂盒内容及其配制
试剂盒成份(2-8℃保存) *6孔配置 48孔配置 配制
*6/48人份酶标板 *块板(*6T) 半块板(48T) 即用型
塑料膜板盖 *块 半块 即用型
标准品:80IU/ml *瓶(0.6ml) *瓶(0.*ml) 按说明书进行稀稀
空白对照 *瓶(*.0ml) *瓶(0.*ml) 即用型
标准品稀释缓冲液 *瓶(*ml) *瓶(2.*ml) 即用型
生物素标记的抗Inhibin A抗体 *瓶(6ml) *瓶(*.0ml) 即用型
亲和链酶素-HRP *瓶(*0ml) *瓶(*.0ml) 即用型
洗涤缓冲液 *瓶(20ml) *瓶(*0ml) 按说明书进行稀释
底物A *瓶(6.0ml) *瓶(*.0ml) 即用型
底物B *瓶(6.0ml) *瓶(*.0ml) 即用型
终止液 *瓶(6.0ml) *瓶(*.0ml) 即用型
标本稀释液 *瓶(*2ml) *瓶(6.0ml) 即用型
自备材料
蒸馏水。
加样器:*ul、*0ul、*0ul、*00ul、200、*00ul、*000ul。
振荡器及磁力搅拌器等。
安全性
避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项
试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
牛(Cattle)抑制素A (Inhibin A)ELISA 检测试剂盒样品收集、处理及保存方法
血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,*000×g离心*0分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。*000×g离心*0分钟去除颗粒。
细胞上清液---*000×g离心*0分钟去除颗粒和聚合物。
组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。*000×g离心*0分钟,取上清液
保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-*0 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在**℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
试剂的准备
标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:
80 IU/ml (6号标准品) 原倍浓度不用稀释直接加入*0ul。
40 IU/ml (*号标准品) *00ul的原倍标准品加入*00ul的标准品稀释液
20 IU/ml (4号标准品) *00ul的*号标准品加入*00ul的标准品稀释液
*0 IU/ml (*号标准品) *00ul的4号标准品加入*00ul的标准品稀释液
*.0 IU/ml (2号标准品) *00ul的*号标准品加入*00ul的标准品稀释液
2.* IU/ml (*号标准品) *00ul的2号标准品加入*00ul的标准品稀释液
0 IU/ml (空白对照) 原始浓度不用稀释直接加入*0ul。
洗涤缓冲液(*0×)的稀释:蒸馏水*0倍稀释。

操作步骤
使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液*:*稀释后加入*0ul于反应孔内。
加入稀释好后的标准品*0ul于反应孔、加入待测样品*0ul于反应孔内。立即加入*0ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,**℃温育*小时。
甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡*0秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作*次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,**℃温育*0分钟。
甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡*0秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作*次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
每孔加入底物A、B各*0ul,轻轻振荡混匀,**℃温育*0分钟。避免光照。
取出酶标板,迅速加入*0ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
在4*0nm波长处测定各孔的OD值。
建议使用的实验方案
标准品浓度(IU/ml)
A 80 80 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
B 40 40 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
C 20 20 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
D *0 *0 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
E *.0 *.0 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
F 2.* 2.* 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
G 0 0 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
H 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
局限
6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到精确的结果。
试剂盒性能
*. 灵敏度:最小的检测浓度小于*号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.**0。
2. 特异性:不与人其它细胞因子反应。
*. 重复性:板内、板间变异系数均小于*0%。
牛(Cattle)抑制素A (Inhibin A)ELISA 检测试剂盒结 果 判 断 与 分 析
*、仪器值:于波长4*0nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的Inhibin A标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的Inhibin A含量可根据其OD值由标准曲线换算出浓度。
*、检测值范围:0-80IU/ml
4、敏感度: 0.* IU/ml
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