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大鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)酶联免疫分析 试剂盒实验原理

分类:其他类别 发布时间:2017-11-22 16:52 所在地:
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大鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)酶联免疫分析  试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。用纯化的大鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入肿瘤坏死因子α(TNF-α),再与HRP标记的肿瘤坏死因子α(TNF-α)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)呈正相关。用酶标仪在4*0nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度。  试剂盒组成
*  *0倍浓缩洗涤液  20ml×*瓶  *  终止液  6ml×*瓶  2 酶标试剂 6ml×*瓶 8 标准品(*20ng/L)  0.*ml×*瓶  * 酶标包被板 *2孔×8条 * 标准品稀释液  *.*ml×*瓶  4 样品稀释液 6ml×*瓶 *0 说明书  *份
* 显色剂A液 6ml×*瓶 ** 封板膜  2张    6 显色剂B液 6ml×*/瓶 *2 密封袋  *个
大鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)酶联免疫分析  试剂盒 标本要求
*.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融  2.不能检测含NaN*的样品,因NaN*抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
*. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。 *60ng/L  *号标准品  **0μl的原倍标准品加入**0μl标准品稀释液  *80ng/L 4号标准品 **0μl的*号标准品加入**0μl标准品稀释液  *0ng/L *号标准品 **0μl的4号标准品加入**0μl标准品稀释液  4*ng/L 2号标准品 **0μl的*号标准品加入**0μl标准品稀释液  22.*ng/L *号标准品 **0μl的2号标准品加入**0μl标准品稀释液     2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样*0μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品*0μl(样品最终稀释度为*倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。  *. 温育:用封板膜封板后置**℃温育*0分钟。    4. 配液:将*0倍浓缩洗涤液用蒸馏水*0倍稀释后备用  *. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置*0秒后弃去,如此 重复*次,拍干。  6. 加酶:每孔加入酶标试剂*0μl,空白孔除外。  *. 温育:操作同*。 8. 洗涤:操作同*。  *. 显色:每孔先加入显色剂A*0μl,再加入显色剂B*0μl,轻轻震荡混匀,**℃避光显色 **分钟.  *0. 终止:每孔加终止液*0μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。  **. 测定:以空白空调零,4*0nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止 液后**分钟以内进行。
大鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)酶联免疫分析  试剂盒注意事项
*.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡**-*0分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。  2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。  *.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间*控制在*分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,*做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值 大于标准品孔*孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请*乘以总稀释倍数(×n×*)。 *. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
*.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
*.本试剂不同批号组分不得混用。
*0. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
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