详细内容
本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。将标准品、待测样本加入到预先包被血管紧张素原(丝氨酸蛋白酶抑制剂,分支A成员8)(AGT)透明酶标包被板中,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分,再加入酶标工作液,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根过氧化物酶(HRP)催化下转化为蓝色产物,在酸的作用下变成黄色,颜色的深浅与样品中血管紧张素原(丝氨酸蛋白酶抑制剂,分支A成员8)(AGT)浓度呈正相关,4*0nm波长下测定OD值,根据标准品和样品的OD值,计算样本中血管紧张素原(丝氨酸蛋白酶抑制剂,分支A成员8)(AGT)含量。
操作步骤
*、准备:从冰箱取出试剂盒,室温复温平衡*0分钟。
2、配液:用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
*、加标准品和待测样本:取足够数量的酶标包被板,固定于框架上,分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔,记录各孔位置,在标准品孔中加入标准品*0μL;待测样本孔中先加入待测样本*0μL,再加样本稀释液40μL(即样本稀释*倍);空白对照孔不加。
4、温育:**℃水浴锅或恒温箱温育*0min。
*、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置*min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。
6、加酶标工作液:每孔加入酶标工作液*0μL,空白对照孔不加。
*、温育:重复4的操作。
8、洗板:重复*的操作。
*、显色:每孔先加入显色剂A 液*0μL,再加入显色剂B液 *0μL,**℃避光显色**min。
*0、终止:取出酶标板,每孔加终止液*0μL,终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。
**、测定:以空白孔调零,在终止后**分钟内,用4*0nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。
*2、计算:根据标准品的浓度及对应的OD值,计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样本的OD值,在回归方程上计算出对应的样品浓度,也可以使用各种应用软件来计算。最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。
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