大鼠总自由基（T-FR）酶联免疫分析试剂盒使用目的 ：
本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中总自由基(T-FR)的含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠总自由基(T-FR)水平。用纯化的大鼠总自由
基(T-FR)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入总自由基(T-FR)，
再与 HRP 标记的总自由基(T-FR)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤
后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的
黄色。颜色的深浅和样品中的总自由基(T-FR)呈正相关。用酶标仪在 4*0nm 波长下测定吸光
度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠总自由基(T-FR)浓度。
试剂盒组成
*  *0 倍浓缩洗涤液  20ml×* 瓶  *  终止液  6ml×* 瓶
2  酶标试剂  6ml×* 瓶  8  标准品（*600ng/L）  0.*ml×* 瓶
*  酶标包被板  *2 孔×8 条  *  标准品稀释液  *.*ml×* 瓶
4  样品稀释液  6ml×* 瓶  *0  说明书  * 份
*  显色剂 A 液  6ml×* 瓶  **  封板膜  2 张
6  显色剂 B 液  6ml×*/瓶  *2  密封袋  * 个
标本 要求
*．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含 NaN* 的样品，因 NaN* 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
*.  标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
800 ng/L  * 号标准品  **0µl 的原倍标准品加入 **0µl 标准品稀释液
400 ng/L  4 号标准品  **0µl 的 * 号标准品加入 **0µl 标准品稀释液
200 ng/L  * 号标准品  **0µl 的 4 号标准品加入 **0µl 标准品稀释液
*00 ng/L  2 号标准品  **0µl 的 * 号标准品加入 **0µl 标准品稀释液
*0 ng/L  * 号标准品  **0µl 的 2 号标准品加入 **0µl 标准品稀释液
2.  加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 *0µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，
然后再加待测样品 *0µl（样品最终稀释度为 * 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
*.  温育：用封板膜封板后置 **℃温育 *0 分钟。
4.  配液：将 *0 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 *0 倍稀释后备用
*.  洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 *0 秒后弃去，如此
重复 * 次，拍干。
6.  加酶：每孔加入酶标试剂 *0µl，空白孔除外。
*.  温育：操作同 *。
8.  洗涤：操作同 *。
*.  显色：每孔先加入显色剂 A*0µl，再加入显色剂 B*0µl，轻轻震荡混匀，**℃避光显色
** 分钟.
*0. 终止：每孔加终止液 *0µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
**. 测定：以空白空调零，4*0nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止
液后 ** 分钟以内进行。
大鼠总自由基（T-FR）酶联免疫分析试剂盒操作程序总结 ：

计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。
注意事项
*．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 **-*0 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
*．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间*
控制在 * 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，*做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值
大于标准品孔*孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计
算时请*乘以总稀释倍数（×n×*）。
*． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
*．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
*．本试剂不同批号组分不得混用。
*0. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
大鼠总自由基（T-FR）酶联免疫分析试剂盒保存条件及有效期
*．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 个月