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天成医疗网首页> 供应信息> 诊断试剂> 猪伪狂犬病毒抗体Gb(PRV Gb)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒

猪伪狂犬病毒抗体Gb(PRV Gb)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒

分类:诊断试剂 发布时间:2017-09-12 16:45 所在地:
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猪伪狂犬病毒抗体Gb(PRV Gb)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒目的:本试剂盒用于检测猪血清,血浆中伪狂犬病毒抗体Gb(PRV Gb)水平。
实验原理:
本试剂盒采用双抗原夹心酶联免疫法(ELISA)测定标本中猪伪狂犬病毒抗体Gb(PRV Gb)。用纯化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可与样品中PRV Gb相结合,经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在4*0nm波长下测定吸光度(OD值),与CUTOFF值相比较,从而判定标本中猪伪狂犬病毒抗体Gb(PRV Gb)的存在与否。
样本处理及要求:
*. 血清:室温血液自然凝固*0-20分钟,离心20分钟左右(2000-*000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合*0-20分钟后,离心20分钟左右(2000-*000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
*. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-*000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-*000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH*.2-*.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到*00万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-*000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
*. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH*.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH*.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-*000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
*. 不能检测含NaN*的样品,因NaN*抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤:
*. 编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照*孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)
2. 加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照*0μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品*0μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,
*. 温育:用封板膜封板后置**℃温育*0分钟。
4. 配液:将*0(48T的20倍)倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml后备用
*. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置*0秒后弃去,如此重复*次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂*0μl,空白孔除外。
*. 温育:操作同*。
8. 洗涤:操作同*。
*. 显色:每孔先加入显色剂A *0μl,再加入显色剂B *0μl,轻轻震荡混匀,**℃避光显色**分钟
*0. 终止:每孔加终止液*0μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
**. 测定:以空白空调零,4*0nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后**分钟以内进行。
猪伪狂犬病毒抗体Gb(PRV Gb)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒结果判定:
试验有效性:阳性对照孔平均值≥*.00; 阴性对照平均值≤0.*0
临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.**
阴性判定:样品OD值< 临界值(CUT OFF)者为猪PRV Gb阴性
阳性判定:样品OD值≥ 临界值(CUT OFF)者为猪PRV Gb阳性
注意事项
*.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。
2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡**-*0分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
*.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
*.底物请避光保存。
6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为6*0nm
*.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸,使用时必须注意安全。
保存条件及有效期
*.试剂盒保存:;2-8℃。
2.猪伪狂犬病毒抗体Gb(PRV Gb)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒有效期:6个月
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