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天成医疗网首页> 供应信息> 诊断试剂> 人软骨糖蛋白39(YKL-40)ELISA检测试剂盒

人软骨糖蛋白39(YKL-40)ELISA检测试剂盒

分类:诊断试剂 发布时间:2017-09-12 16:40 所在地:
60℃

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主要参数

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详细内容

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人软骨糖蛋白**(YKL-40)ELISA检测试剂盒用    途: 用于人血清、血浆及相关液体样本中软骨糖蛋白**(YKL-40)的测定。
检测原理
本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定样品中人软骨糖蛋白**(YKL-40)的水平。向预先包被了人软骨糖蛋白**(YKL-40)单克隆抗体的酶标孔中加入软骨糖蛋白**(YKL-40),温育;温育后,加入生物素标记的软骨糖蛋白**(YKL-40)抗体,再与链霉亲和素-HRP结合,形成免疫复合物,再经过温育和洗涤,去除未结合的酶,然后加入底物A、B,产生蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中人软骨糖蛋白**(YKL-40)的浓度呈正相关。
2,-20℃,-86℃).
*.  漩涡混合仪,低频振荡器等
注意事项
*. 从2-8℃取出的试222222试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
*. 底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。
6.   所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按生物废弃物处理。终止液为2M硫酸,使用时必须注意安全。
*.  各步骤加样均应使用加样器,并经常校准其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在*分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
8.  每次试验测定的同时做标准曲线,。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔最高浓度的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n)。
*.  配制试剂时,要用旋涡混合仪混匀。加入孔内的试剂,充分混匀对测试结果尤为重要,最好使用微量振荡器(使用最低频率),如无微量振荡器,可在反应前手工轻轻晃动酶标板*分钟,例如做圆周动作,使加入孔中的反应液混匀。
*0.  实验用酶标仪应严格按使用说明书规范操作,并在使用前充分预热。
**.  手工洗板应注意:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少0.**ml注入孔内,浸泡*-2分钟。根据需要,重复此过程数次。自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

样本要求
*.不能检测含NaN*的样品,因NaN*抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存或根据存放,时间做相应温度调整,但应避免反复冻融,(由于样本种类过多,每个单位处理方式不一样,本说明书不做详细介绍)。

人软骨糖蛋白**(YKL-40)ELISA检测试剂盒操作程序
*. 标准品的稀释:(本试剂系统提供原倍标准品一支,用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释)按下表格执行:
2*0pg/ml
(*号标准品)
*20μl的原倍标准品加入*20μl的标准品稀释液
*2*pg/ml
(4号标准品)
*20μl的*号标准品加入*20μl的标准品稀释液
62.*pg/ml
(*号标准品)
*20μl的4号标准品加入*20μl的标准品稀释液
**.2pg/ml
(2号标准品)
*20μl的*号标准品加入*20μl的标准品稀释液
**.6pg/ml
(*号标准品)
*20μl的2号标准品加入*20μl的标准品稀释液
2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
*. 加样:*)空白孔:(空白对照孔不加样品,生物素标记的抗软骨糖蛋白**(YKL-40)抗体,链霉亲和素-HRP,其余各步操作相同 ;2)标准品孔:加入标准品*0μl,链霉亲和素-HRP*0μl(标准品中已事先整合好生物素标记抗体,故在操作时不加,只加链霉素-HRP);*)样本反应孔:加入样本40μl,然后各加入抗软骨糖蛋白**(YKL-40)抗体*0μl、链霉亲和素-HRP(空白孔除外)*0μl。盖上封板膜,轻轻振荡混匀,**℃温育60分钟。
4. 配液:将*0倍浓缩洗涤液用蒸馏水*0倍稀释后备用。20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释备用。
*. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置*0秒后弃去,如此重复*次,拍干。
6. 显色:每孔先加入显色剂A *0μl,再加入显色剂B *0μl,轻轻震荡混匀,**℃避光显色*0分钟。
*. 终止:每孔加终止液*0μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
8. 测定:以空白空调零,4*0nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后*0分钟以内进行。

结果判断
*.  每个标准品和标本的OD值应减去零孔的OD值。(若不减零孔值,标准曲线的零孔应相交于Y轴)
2. 根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种熟悉应用软件来计算。
*.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标,OD值作纵坐标,以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。推荐使用专业制作曲线软件进行分析计算结果。
4.若标本OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重测,计算浓度时应乘以稀释倍数。

操作总结

准备试剂,样品和标准品
人软骨糖蛋白**(YKL-40)ELISA检测试剂盒

加入准备好的样品和标准品,生物素标记二抗和酶标试剂,**℃反应60分钟。
人软骨糖蛋白**(YKL-40)ELISA检测试剂盒

洗板*次,加入显色液A、B,**℃显色*0分钟
人软骨糖蛋白**(YKL-40)ELISA检测试剂盒

加入TMB终止液
人软骨糖蛋白**(YKL-40)ELISA检测试剂盒

*0分钟内酶标仪测OD值
人软骨糖蛋白**(YKL-40)ELISA检测试剂盒

计算待测样本因子含量
试剂盒性能
*. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.*200。
2. 灵敏度:最小可检测浓度达,*.0*pg/ml。
*. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性:板内、板间变异系数均小于**%。
* . 回收率:*0-**0%.
6. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。
*. 有效期:6个月
8. 人软骨糖蛋白**(YKL-40)ELISA检测试剂盒检测范围: 480pg/ml -*.*pg/ml
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