人软骨糖蛋白**(YKL-40)ELISA检测试剂盒用    途： 用于人血清、血浆及相关液体样本中软骨糖蛋白**(YKL-40)的测定。
检测原理
本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中人软骨糖蛋白**(YKL-40)的水平。向预先包被了人软骨糖蛋白**(YKL-40)单克隆抗体的酶标孔中加入软骨糖蛋白**(YKL-40)，温育；温育后，加入生物素标记的软骨糖蛋白**(YKL-40)抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中人软骨糖蛋白**(YKL-40)的浓度呈正相关。
2,-20℃,-86℃）.
*.  漩涡混合仪，低频振荡器等
注意事项
*． 从2-8℃取出的试222222试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
*． 底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
6.   所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按生物废弃物处理。终止液为2M硫酸，使用时必须注意安全。
*.  各步骤加样均应使用加样器，并经常校准其准确性，以避免试验误差。一次加样时间*控制在*分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
8.  每次试验测定的同时做标准曲线，。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*浓度的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请*乘以总稀释倍数（×n）。
*.  配制试剂时，要用旋涡混合仪混匀。加入孔内的试剂，充分混匀对测试结果尤为重要，*使用微量振荡器(使用*频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻晃动酶标板*分钟，例如做圆周动作，使加入孔中的反应液混匀。
*0.  实验用酶标仪应严格按使用说明书规范操作，并在使用前充分预热。
**.  手工洗板应注意：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.**ml注入孔内，浸泡*-2分钟。根据需要，重复此过程数次。自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

样本要求
*．不能检测含NaN*的样品，因NaN*抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存或根据存放，时间做相应温度调整，但应避免反复冻融，（由于样本种类过多，每个单位处理方式不一样，本说明书不做详细介绍）。

人软骨糖蛋白**(YKL-40)ELISA检测试剂盒操作程序
*． 标准品的稀释：（本试剂系统提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释）按下表格执行：
2*0pg/ml
（*号标准品）
*20μl的原倍标准品加入*20μl的标准品稀释液
*2*pg/ml
（4号标准品）
*20μl的*号标准品加入*20μl的标准品稀释液
62.*pg/ml
（*号标准品）
*20μl的4号标准品加入*20μl的标准品稀释液
**.2pg/ml
（2号标准品）
*20μl的*号标准品加入*20μl的标准品稀释液
**.6pg/ml
（*号标准品）
*20μl的2号标准品加入*20μl的标准品稀释液
2． 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
*． 加样：*）空白孔：（空白对照孔不加样品，生物素标记的抗软骨糖蛋白**(YKL-40)抗体，链霉亲和素-HRP，其余各步操作相同 ；2）标准品孔:加入标准品*0μl，链霉亲和素-HRP*0μl（标准品中已事先整合好生物素标记抗体，故在操作时不加，只加链霉素-HRP）；*）样本反应孔：加入样本40μl，然后各加入抗软骨糖蛋白**(YKL-40)抗体*0μl、链霉亲和素-HRP（空白孔除外）*0μl。盖上封板膜，轻轻振荡混匀，**℃温育60分钟。
4． 配液：将*0倍浓缩洗涤液用蒸馏水*0倍稀释后备用。20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释备用。
*． 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置*0秒后弃去，如此重复*次，拍干。
6． 显色：每孔先加入显色剂A *0μl，再加入显色剂B *0μl，轻轻震荡混匀，**℃避光显色*0分钟。
*． 终止：每孔加终止液*0μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
8． 测定：以空白空调零，4*0nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后*0分钟以内进行。

结果判断
*.  每个标准品和标本的OD值应减去零孔的OD值。（若不减零孔值，标准曲线的零孔应相交于Y轴）
2. 根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种熟悉应用软件来计算。
*．手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。推荐使用专业制作曲线软件进行分析计算结果。
4．若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。

操作总结

准备试剂，样品和标准品
人软骨糖蛋白**(YKL-40)ELISA检测试剂盒

加入准备好的样品和标准品，生物素标记二抗和酶标试剂，**℃反应60分钟。
人软骨糖蛋白**(YKL-40)ELISA检测试剂盒

洗板*次，加入显色液A、B,**℃显色*0分钟
人软骨糖蛋白**(YKL-40)ELISA检测试剂盒

加入TMB终止液
人软骨糖蛋白**(YKL-40)ELISA检测试剂盒

*0分钟内酶标仪测OD值
人软骨糖蛋白**(YKL-40)ELISA检测试剂盒

计算待测样本因子含量
试剂盒性能
*. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.*200。
2. 灵敏度：最小可检测浓度达，*.0*pg/ml。
*. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性：板内、板间变异系数均小于**%。
* . 回收率：*0-**0%.
6. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
*. 有效期：6个月
8. 人软骨糖蛋白**(YKL-40)ELISA检测试剂盒检测范围： 480pg/ml -*.*pg/ml