人血红蛋白（Hb）酶联免疫分析ELISA试剂盒实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人血红蛋白（Hb）水平。用纯化的人血红蛋白（Hb） 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血红蛋白（Hb），再与 HRP 标记的血红蛋白（Hb）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜 色的深浅和样品中的血红蛋白（Hb）呈正相关。用酶标仪在 4*0nm 波长下测定吸光度（OD 值）， 通过标准曲线计算样品中人血红蛋白（Hb）浓度。
样本处理及要求：
*. 血清：室温血液自然凝固*0-20分钟，离心20分钟左右（2000-*000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合*0-20分钟后，离心20分钟左右（2000-*000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
*. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-*000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-*000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH*.2-*.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到*00万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-*000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
*. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH*.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH*.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-*000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
*. 不能检测含NaN*的样品，因NaN*抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
人血红蛋白（Hb）酶联免疫分析ELISA试剂盒操作步骤
*. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔*0孔，在、第二孔中分别加标准品*00μl，然后在、第二孔中加标准品稀释液*0μl，混匀；然后从孔、第二孔中各取*00μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液*0μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取*0μl弃掉，再各取*0μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液*0ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取*0μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液*0μl，混匀后从第七、第八孔中分别取*0μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液*0μl，混匀后从第九第十孔中各取*0μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为*0μl，浓度分别为*00ng/L，200ng/L ，*00ng/L，*0ng/L， 2*ng/L）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品*0μl（样品最终稀释度为*倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
*. 温育：用封板膜封板后置**℃温育*0分钟。
4. 配液：将*0（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水*0（48T的20倍）倍稀释后备用。
*. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置*0秒后弃去，如此重复*次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂*0μl，空白孔除外。
*. 温育：操作同*。
8. 洗涤：操作同*。
*. 显色：每孔先加入显色剂A*0μl，再加入显色剂B*0μl，轻轻震荡混匀，**℃避光显色**分钟.
*0. 终止：每孔加终止液*0μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
**. 测定：以空白空调零，4*0nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后**分钟以内进行。
注意事项：
*． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡**-*0分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
*． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在*分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请*乘以总稀释倍数（×n×*）。
*． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物请避光保存。
*． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
*． 本试剂不同批号组分不得混用。
*0. 如与英文说明书有异，以人血红蛋白（Hb）酶联免疫分析ELISA试剂盒英文说明书为准。