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大鼠结合珠蛋白(HP)ELISA试剂盒

分类:诊断试剂 发布时间:2017-05-10 16:48 所在地:
242℃

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大鼠结合珠蛋白(HP)ELISA试剂盒样本处理及要求:
*. 血清:室温血液自然凝固*0-20分钟,离心20分钟左右(2000-*000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合*0-20分钟后,离心20分钟左右(2000-*000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
*. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-*000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-*000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH*.2-*.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到*00万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-*000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
*. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH*.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH*.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-*000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
*. 不能检测含NaN*的样品,因NaN*抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
大鼠结合珠蛋白(HP)ELISA试剂盒操作步骤
标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔*0孔,在*、第二孔中分别加标准品*00μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液*0μl,混匀;然后从*孔、第二孔中各取*00μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液*0μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取*0μl弃掉,再各取*0μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液*0ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取*0μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液*0μl,混匀后从第七、第八孔中分别取*0μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液*0μl,混匀后从第九第十孔中各取*0μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为*0μl,浓度分别为*80μg/ml,*20μg/ml ,60μg/ml,*0μg/ml, **μg/ml)。
加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品*0μl(样品最终稀释度为*倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
温育:用封板膜封板后置**℃温育*0分钟。
配液:将*0(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水*0(48T的20倍)倍稀释后备用。
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置*0秒后弃去,如此重复*次,拍干。
加酶:每孔加入酶标试剂*0μl,空白孔除外。
温育:操作同*。
洗涤:操作同*。
显色:每孔先加入显色剂A*0μl,再加入显色剂B*0μl,轻轻震荡混匀,**℃避光显色**分钟. 
终止:每孔加终止液*0μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
测定:以空白空调零,4*0nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后**分钟以内进行。
大鼠结合珠蛋白(HP)ELISA试剂盒
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