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    人17羟皮质类固醇(17-OHCS)ELISA试剂盒实验原理

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    人17羟皮质类固醇(17-OHCS)ELISA试剂盒实验原理:
    本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠白细胞介素6(IL-6)水平。用纯化的大鼠白细胞介素6(IL-6)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素6(IL-6),再与HRP标记的白细胞介素6(IL-6)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素6(IL-6)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠白细胞介素6(IL-6)浓度。
    试剂盒组成:
    试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存 说明书  1份  1份   封板膜 2片(48) 2片(96)  密封袋  1个  1个   酶标包被板 1×48 1×96  2-8℃保存 标准品:180ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶  2-8℃保存 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存 酶标试剂  3 ml×1瓶  6 ml×1瓶  2-8℃保存 样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶  2-8℃保存 显色剂A液 3 ml×1瓶  6 ml×1瓶  2-8℃保存 显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 终止液  3ml×1瓶  6ml×1瓶  2-8℃保存 浓缩洗涤液 (20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶  2-8℃保存
    人17羟皮质类固醇(17-OHCS)ELISA试剂盒样本处理及要求
    :  1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。  2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。  3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。  4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞
    浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。 5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。  6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.  7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。   操作步骤:
    1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在*、第二孔中分别加标 准品100µl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50µl,混匀;然后从*孔、第二孔中各取100µl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50µl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50µl弃掉,再各取50µl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50µl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50µl,混匀后从第七、第八孔中分别取50µl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50µl,混匀后从第九第十孔中各取50µl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50µl,浓度分别为120 ng/L,80ng/L ,40 ng/L,20ng/L,10 ng/L)。  2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40µl,然后再加待测样品10µl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。  3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。 5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此 重复5次,拍干。  6. 加酶:每孔加入酶标试剂50µl,空白孔除外。 7. 温育:操作同3。 8. 洗涤:操作同5。  9. 显色:每孔先加入显色剂A50µl,再加入显色剂B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色 15分钟.   10. 终止:每孔加终止液50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。  11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止 液后15分钟以内进行。
    人17羟皮质类固醇(17-OHCS)ELISA试剂盒注意事项:
    1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未 用完,板条应装入密封袋中保存。  2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。  3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间* 控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。  4. 请每次测定的同时做标准曲线,*做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值
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