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    小鼠磷酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA试剂盒实验原理

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    小鼠磷酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA试剂盒实验原理 
    本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛多瘤病毒(POLY)表达。用纯化的牛多瘤病毒(POLY)抗体包被微孔板,制成固相抗体,可与样品中多瘤病毒(POLY)相结合,经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的多瘤病毒(POLY)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),与CUTOFF值相比较,从而判定标本中牛多瘤病毒(POLY)的存在与否。
    试剂盒组成
    130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶 7终止液 6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶 8 阳性对照0.5ml×1瓶3酶标包被板 12孔×8条9 阴性对照0.5ml×1瓶 4样品稀释液 6ml×1瓶10说明书 1份5显色剂A液6ml×1瓶 11 封板膜2张6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个 标本要求 1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融 2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
    小鼠磷酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA试剂盒操作步骤 
    1.编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照
    2孔、阳性对照2孔、空白对照1 孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同) 2. 加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50µl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40µl,然后再加待测样品10µl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀, 
    3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 
    4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 
    5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。 
    6.加酶:每孔加入酶标试剂50µl,空白孔除外。
    7. 温育:操作同3。
    8.洗涤:操作同5。 9. 显色:每孔先加入显色剂A50µl,再加入显色剂B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 10.终止:每孔加终止液50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。 
    计算和结果判定:
     试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00;阴性对照平均值≤0.10临界值(CUTOFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15 阴性判定:样品OD值<临界值(CUTOFF)者为多瘤病毒(POLY)阴性阳性判定:样品OD值≥临界值(CUTOFF)者为多瘤病毒(POLY)阳性。 
    小鼠磷酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA试剂盒注意事项 
    1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。 
    2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未 用完,板条应装入密封袋中保存。 
    3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
    4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
    5.底物请避光保存。
    6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为630nm 
    7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸,使用时必须 注意安全。
    12-223 BL21 SI 菌种 1mL
    12-223 BL21 SI 菌种 1mL
    12-224 BL21-CodonPlus-RP 菌种 1mL
    12-224 BL21-CodonPlus-RP 菌种 1mL
    12-227 C41(DE3) 菌种 1mL
    12-227 C41(DE3) 菌种 1mL
    12-228 C43(DE3) 菌种 1mL
    12-228 C43(DE3) 菌种 1mL
    12-229 C600 菌种 1mL
    12-229 C600 菌种 1mL
    12-230 DB3.1 菌种 1mL
    12-230 DB3.1 菌种 1mL
    12-231 DH5αλpir 菌种 1mL
    12-231 DH5αλpir 菌种 1mL
    12-232 ER2566 菌种 1mL
    12-232 ER2566 菌种 1mL
    12-233 ER2529 菌种 1mL
    12-233 ER2529 菌种 1mL
    12-234 ER2738 菌种 1mL
    12-234 ER2738 菌种 1mL
    12-235 JF1125 菌种 1mL
    12-235 JF1125 菌种 1mL
    12-236 JM101 菌种 1mL
    12-236 JM101 菌种 1mL
    12-237 JM103 菌种 1mL
    12-237 JM103 菌种 1mL
    12-238 JM105 菌种 1mL
    12-238 JM105 菌种 1mL
    12-239 JM107 菌种 1mL
    12-239 JM107 菌种 1mL
    12-240 JM109(DE3) 菌种 1mL
    12-240 JM109(DE3) 菌种 1mL
    12-242 K802 菌种 1mL
    12-242 K802 菌种 1mL
    12-243 M15 菌种 1mL
    12-243 M15 菌种 1mL
    12-244 Novablue(DE3) 菌种 1mL
    12-244 Novablue(DE3) 菌种 1mL
    12-245 Origami(DE3) 菌种 1mL
    12-245 Origami(DE3) 菌种 1mL
    12-246 Origami B(DE3) 菌种 1mL
    12-246 Origami B(DE3) 菌种 1mL
    12-247 Origami(DE3)plysS 菌种 1mL
    12-247 Origami(DE3)plysS 菌种 1mL
    12-248 Rosetta 菌种 1mL
    12-248 Rosetta 菌种 1mL
    12-249 RosettaBlue(DE3) 菌种 1mL
    12-249 RosettaBlue(DE3) 菌种 1mL
    12-25 BL21(DE3)菌种 1mL
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    12-251 SG1117 菌种 1mL
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    12-252 Stb12 菌种 1mL
    12-252 Stb12 菌种 1mL
    12-253 Stb13 菌种 1mL
    12-253 Stb13 菌种 1mL
    12-254 Stb14 菌种 1mL
    12-254 Stb14 菌种 1mL
    12-255 SURE 菌种 1mL
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    上海谷研生物实业有限公司

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